VIRUS DE L’HEPATITE C
& Marqueurs
Stéphane Chevaliez
Centre National de Référence
Des Hépatites B, C et delta
Laboratoire ...
Virus de l’Hépatite C
I. Aspects Virologiques
Virus de l’Hépatite C
• Famille : Flaviviridae
• Genre : Hepacivirus
Phylogénie de la région codant la protéine NS5B
Virus...
• Famille : Flaviviridae
• Genre : Hepacivirus
• Hôte naturel : Homme
Virus de l’Hépatite C
Bartenschalger et al., 2004.
V...
Organisation Structurale
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Organisation Structurale
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Organisation Structurale
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Organisation Génomique
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
NS4A
NS4B
p7
Adapted from Tail et al., Nature Reviews Drug Disco...
Régions 5’ et 3’NC
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
NS4A
NS4B
p7
Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery,...
Site d’Entrée Interne du Ribosome
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6)...
From Department of Structural Biology, Stanford University Medical School, USA
Site d’Entrée Interne du Ribosome
Virus de ...
Organisation Génomique
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
NS4A
NS4B
p7
Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Discov...
STÉATOSE
ROS
FIBROSE
Activation des cellules étoilées
Insulino-
Résistance
Cytokines (TNF, TGF, IL-8, FasL)
Produits de ...
Piodi et al., Hepatology 2008, 48(1): 16-27.
VHC génotype 1b
xy
z
Piodi et al., Hepatology 2008, 48(1): 16-27.
Glycoprotéines E1-E2
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
NS4A
NS4B
p7
Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Discover...
Glycoprotéines d’Enveloppe
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Heijne et al., Nature Reviews Molecular cell Biology, 2006; ...
Région HVR1 (27 amino-acides)
 80% de divergence nucléotidique entre génotypes
 Epitope majeur de neutralisation
Timm et...
Protéine Non-structurale 3
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
NS4A
NS4B
p7
Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Di...
1 631189
Sérine protéase Hélicase/NTPase
Protéine NS3
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Sérine protéase
• Modulateur de la réponse interféron type I via les
Toll-Like receptor (TLR3)
Hélicase/NTPase
Protéine NS...
Bode et al., 2007; Archives of Biochemistry and Biophysics, 462: 6254-265
Production d’IFN- en Réponse à
une Infection Vi...
Bode et al., 2007; Archives of Biochemistry and Biophysics, 462: 6254-265
1. Clivage de TRIF 2. Clivage de CARDIF
Inhibiti...
Sérine protéase
• Modulateur de la réponse interféron type I via les
Toll-Like receptor (TLR3)
• Cible de molécules antivi...
OPM Database, University of Michigan, College of Pharmacy.
Site actif
(His57, Asp81, Ser139)
Telaprevir (VX-950)
Boceprevir (SCH 503034)
ITMN 191
Protéine NS4B
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
NS4A
NS4B
p7
Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002...
Complexe de Réplication
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463.
ARN Polymérase ARN-dépendante
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
NS4A
NS4B
p7
Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug...
Lesburg et al., Nat struct Biol 1999, 6: 937-943; Bressanelli et al., Proc Natl Acad Sci USA 1999, 96: 13034-13039; Ago et...
Réplication
– Modèle du poliovirus
. Virus à ARN monocaténaire
de polarité positive
De Clercq., Nature Review Drug Discove...
Copyright © 2006 Merck & Co., Inc., Whitehouse Station, New Jersey, USA
A
NNI site A (Thumb/fingertips)
Indoles
Benzimidaz...
Cycle Viral
Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Cycle Viral
Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Modèle d’Entrée Virale
Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463.
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Cycle Viral
Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463.
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Maturation de la Polyprotéine
Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463.
Virus de l’Hépatite C et Ma...
Structure des Protéines NS
Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463.
Virus de l’Hépatite C et Marqu...
Cycle Viral
Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463.
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Complexes de Réplication
Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463.
Virus de l’Hépatite C et Marqueu...
Cycle Viral
Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463.
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Virus de l’Hépatite C
II. Modèles d’Etude
Souris transgéniques
Souris SCID/uPA
Modèles Animaux
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Visualisation des cellules
Huh7 infectées
3 - Vecteur de transfert de la GFP
2 - Expression des glycoprotéines E1E2 du VHC...
A
B
Adapted from Nature Review Drug Discovery, 2002; 1:911-916
Réplicons Subgénomiques
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Adapted from www.molecular-virology.uni-hd.de
Système Productif (HCVcc)
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Virus de l’Hépatite C
III. Variabilité Génétique
Virus de l’hépatite C
Production virale (/24 heures) 1012
T1/2 virus libre (heures) 2 - 3
T1/2 brin ARN (heures) ~10
Taux ...
• Erreurs au cours de la réplication
– Fréquentes
. 10-4
-10-4
mutations par nucléotide copié au cours de la réplication d...
Simmonds et al. Hepatology 2005.
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Diversification des Génotypes
7
Central
Africa
Murphy et al., AASLD, Hepatology, 2007.
Diversification des Génotypes
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
• Facteur prédictif de la réponse au
traitement
• Conditionne
– La dose de ribavirine (800 - 1400 mg)
– La durée de traite...
Weiner et al., Virology 1991; 180:842-848; Martell et al., J Virol 1992;66:3225-36.
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Dis...
• Dérive génétique
– Accumulation de mutations ponctuelles
• Glissement génétique
– Suite à la modification brutale de l’e...
• Joue un rôle dans le maintien de
l’infection chronique
• Joue un rôle dans l’échec des
traitements antiviraux
• Joue un ...
Virus de l’Hépatite C
IV. Exemples d’Application
de la Variabilité Génétique
• Diversification et diffusion du VHC
• Transmission du VHC
• Mécanismes de persistance et d’infection du VHC
• Compartime...
• Diversification et diffusion du VHC
• Transmission du VHC
• Mécanismes de persistance et d’infection du VHC
• Compartime...
7
Central
Africa
Murphy et al., AASLD, Hepatology, 2007.
Diversification des Génotypes
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Génotype & Mode de Transmission
52% 54%
63%
0%
20%
40%
60%
80%
100%
UDVI Transfusion Autres
3
1b
1a
Autres
Pawlotsky et al...
27%
39%
36%
0%
20%
40%
60%
80%
100%
UDVI Transfusion Autres
4
3
2
1b
1a
1nt
Payan et al., J Viral Hepat 2005;12: 405-13.
G...
Génotype 3a
Chez les UDVI
0.1 substitution per site
JK049
TrKj
NE125
NE048
HCV-3a
HCV-3f
HCV-3c
HCV-3b
HCV-3k
Australie
US...
• Diversification et diffusion du VHC
• Transmission du VHC
• Mécanismes de persistance et d’infection du VHC
• Compartime...
• Mise en évidence d’une séroconversion VHC lors du
dépistage et du suivi des patients hémodialysés en
juillet 2005, à l’h...
 Identification de deux cas de
séroconversion en 2004 au sein de l’unité
d’hémodialyse de l’hôpital Henri Mondor :
– Pati...
1h_FrSSD98
1h_98CM1521
1h_98CM1357
1f_FR2
1i_FR16
1i_QC77
1iQC181
1m_GUI17
1m_GUI11
1m_GUI24
1d_HC1N16
1d_BA107
1d_FR17
Pa...
6a_33
2b_JFH1
Patient 1 (7/04)
5a_SA13
1b_HVR3812
S5 (7/05)
Patient 3 (7/05)
Patient 3 (9/05)
Patient 2 (7/04)
Patient 2 (...
6a_33
2b_JFH1
Patient 1 (7/04)
5a_SA13
1b_HVR3812
S5 (7/05)
Patient 3 (7/05)
Patient 3 (9/05)
Patient 2 (7/04)
Patient 2 (...
• Screening de 64 patients hémodialysés à l’hôpital
Hubert Kutuku Maga, Cotonou, Bénin (Afrique)
– Détection anticorps ant...
Analyse Phylogénique
5aSA13
2aHCJ6
Patient 49
6aEUHK2 3aNLZ1
Patient 62
4aED43
1hFrSSD98
1h98CM1357
1h98CM1521
1cHCG9
1cSR...
Transmissions Nosocomiales
Région HVR1 (81 nt)
CLUSTALX
DNADist (PHYLIP 3.5)
Matrice de distance: Kimura 2-
parameter (Ts/...
MAXIMUM DE VRAISEMBLANCE
Assignation Provisoire d’un Nouveau
Sous-type : Etude de la région NS5B
Patient 16
Patient 18
Pat...
MAXIMUM DE VRAISEMBLANCE
Assignation Provisoire d’un Nouveau
Sous-type : Etude de la région Core-E1
PARCIMONIE
Patient 7
P...
• Epidémie à VHC au sein d’une unité d’hémodialyse en
Grèce ("Papageorgiou General Hospital", Thessaloniki)
• 17 patients ...
0,1 substitution per site
HCV-1
HCV-H
SR052
HC-G9
SR037
HC-J4
HCV-BK
BE90
Pt-11
Pt-10
Pt-9
Pt-5
Pt-12
Pt-13
Pt-15
Pt-16
Pt...
Incubation HCVpp avec
des dilutions de sérum
Détermination de
l’infectivité (bruit de fond)
Détermination de l’activité
ne...
Patient-10 (souche B)
ARN VHC
(UI/mL)
Semaines
% neutralisation
infection
Huh7
ARN VHC
Réponse Neutralisante
ALAT
Contrôle...
• Réponse neutralisante forte et spécifique
• Réponse neutralisante inversement proportionnelle
à la cinétique de la charg...
• Diversification et diffusion du VHC
• Transmission du VHC
• Mécanismes de persistance et d’infection du VHC
• Compartime...
Histoire Naturelle
Hépatite Aiguë
Hépatite Chronique
50 - 85%
Cirrhose 20 - 30%
Décompensation
6 - 10%
HCC
4 - 5% par an
M...
Histoire Naturelle
Hépatite Aiguë
Hépatite Chronique
50 - 85%
Cirrhose 20 - 30%
Décompensation
6 - 10%
HCC
4 - 5% par an
M...
Persistance Virale
• Persistance virale
– Echec de la réponse immune, pourtant
présente et adaptée, à éliminer le virus ou...
Processus Multi-étape
Hépatite Aiguë
Infection Chronique
Hépatite Chronique
50 - 85%
1. Mise en place de l’infection aiguë...
Hépatite Aiguë
Infection Chronique
Hépatite Chronique
50 - 85%
1. Mise en place de l’infection aiguë
2. Etablissement de l...
Adapted from Ferrari C, Gasroenterology 2007; 132(2): 801-805
Persistance du VHC
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
• Diversification et diffusion du VHC
• Transmission du VHC
• Mécanismes de persistance et d’infection du VHC
• Compartime...
Roque-Afonso et al., J Virol 2005;79:6349-57)
Région 5’NC Région E1-E2
Compartimentation Plasma-PBMC
Virus de l’Hépatite C...
• Diversification et diffusion du VHC
• Transmission du VHC
• Mécanismes de persistance et d’infection du VHC
• Compartime...
HEPATITE C : Stratégie
Diagnostique & Suivi
Virologique
Virus de l’Hépatite C
I. Cinétique des Marqueurs
Virologiques
Marqueurs Virologiques
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Marqueurs indirects
Anticorps anti-VHC totaux
Marqueurs ...
Cinétique des Marqueurs
ARN VHC
Symptômes +/-
Temps après contage (mois)
Titre
Anti-VHC
ALAT
Normal
0 1 2 3 4 5 6 12 24 36...
Cinétique des Marqueurs
ARN VHC
Symptômes +/-
Temps après contage (mois)
Titre
Anti-VHC
ALAT
0 1 2 3 4 5 6 12 24 36 48
Inf...
Virus de l’Hépatite C
II. Tests Virologiques
Tests Virologiques Moléculaires
Tests quantitatifs
Seuil de détection ≥ qualitatifs
Quelle quantité est présente ?
Tests q...
Tests Virologiques Moléculaires
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Est-ce que le VHC est présent et en quelle quan...
Détection-Quantification de
l’ARN VHC
Intérêts de la Détection -
Quantification de l’ARN VHC
• Evaluation de la réplication virale chez des
patients anticorps a...
Techniques Disponibles
b-DNA PCR
Branched DNA Polymerase chain reaction
Amplification du signal Amplification de la cible
...
Principe des Techniques
b-DNA PCR
Branched DNA Polymerase chain reaction
Amplification du signal Amplification de la cible...
bDNA : Principe
ARN VHC
Capture Probe
Capture Extender
Label extender
Preamplifier
Amplifier with hybridized
label probe
A...
bDNA : Forces & Faiblesses
• Forces
– Quantification indépendante du génotype
– Tolérance de polymorphismes nucléotidiques...
Principe des Techniques
b-DNA PCR
Branched DNA Polymerase chain reaction
Amplification du signal Amplification de la cible...
PCR : Principe
VHC ARN ADNc Amplicons
(ADNdb)
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Avantages Techniques de la PCR
en temps réel
• Diminution du risque de contamination
• Amélioration de la sensibilité
• Au...
10 102 103 104 105 106 107 108
Cobas Amplicor
HCV Monitor v2.0
SuperQuant
LCx HCV RNA
Assay
Versant HCV RNA
3.0 (bDNA)
Int...
10 102 103 104 105 106 107 108
Cobas Amplicor
HCV Monitor v2.0
SuperQuant
LCx HCV RNA
Assay
Versant HCV RNA
3.0 (bDNA)
Taq...
• Diminution du risque de contamination
• Amélioration de la sensibilité
• Augmentation de l’intervalle de
quantification ...
Plates-formes
CAP-CTM96 (ROCHE)
kPCR (SIEMENS)
m2000SP-m2000RT (ABBOTT)
Stratégie diagnostique & suivi virologique
• Remplace les techniques qualitatives de
détection de l’ARN VHC
• Quantifie l’ensemble des charges virales
observées en p...
Quantification de l’ARN du VHC
CAP-CTM48 (Roche) versus bDNA 3.0 (Siemens)
DifferencebetweenHBVDNAlevelsmeasuredin
CAP/CTM...
Différences de Quantification
Chevaliez et al., 2007; Hepatology, 46(1): 22-31.
Genotype 1 (n=29)
Genotype 2 (n=27)
Genoty...
Chevaliez et al., manuscript in preparation.
m2000SP-m2000RT (Abbott) versus bDNA 3.0 (Siemens)
Mean of HCV RNA levels mea...
David Sherman., Molecular Symposium, September 2007 (source: Siemens Medical Solutions Diagnostics).
kPCR HCV 1.0 (Siemens...
Détermination du Génotype
Génotypes du VHC
Simmonds et al. Hepatology 2005; Murphy et al., AASLD, Hepatology, 2007.
7
Central
Africa
Stratégie diagn...
Intérêts de la Détermination du
Génotype
• Détermination systématique du
génotype
– Facteur prédictif de la réponse au
tra...
Détermination du Génotype
• Détermination moléculaire du génotype
VHC (génotypage)
• Détermination sérologique du génotype...
Détermination du Génotype
• Détermination moléculaire du génotype
VHC (génotypage)
• Détermination sérologique du génotype...
Cibles pour le Génotypage
NS4A
NS4B
p7
Adapted from Tail et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
Straté...
Cibles pour le Génotypage
NS4A
NS4B
p7
Adapted from Tail et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
Straté...
Méthodes de Génotypage
• Séquençage direct des produits d’amplification1
• Restriction fragment length polymorphism analys...
Méthodes de Génotypage
• Séquençage direct des produits d’amplification1
• Restriction fragment length polymorphism analys...
Versant® HCV Genotype 2.0 Assay
3
17
15
20
21
23. AC
Marker
CC
AC
4
5
10
12
24. 6 c-l
16
2b 3a 4b 6a1b 6c-l1a
6
7
8
9
11
1...
Importance de la Région Virale pour la
Détermination du Sous-type
Analyse
phylogénique
de la région
5’NC
1ère
génération
d...
Virus de l’Hépatite C
III. Diagnostic Virologique
Diagnostic de l’Infection Aiguë
Ac anti-HCV
-
-
+
+
ARN VHC*
-
+
-
+
* Technique sensible seuil de détection ≤ 50 IU/ml
Di...
Diagnostic de l’Infection Chronique
• Détection des anticorps anti-VHC totaux
par ELISA
• Recherche d’ARN du VHC par un te...
Virus de l’Hépatite C
III. Prise en Charge
Thérapeutique
Intérêts des Tests Virologiques
en Thérapeutique
Consensus conference: treatment of hepatitis C; 2002, Gastroenterol Clin ...
Classification des Patients
Type
1
Types
2, 3
Types
4, 5, 6
Génotypes VHC
Consensus conference: treatment of hepatitis C; ...
Indications Actuelles du Traitement
• Patients infectés par un VHC de génotype 1
– Interferon pégylé plus ribavirine (1000...
Génotype VHC
VHC-1 (4,5,6)
Quantification ARN
VHC-2,3
Bithérapie
24 semaines
Ribavirine 800 mg
Bithérapie
48 semaines
Riba...
Optimisation du Traitement en
Fonction de la Réponse Virologique
• Outils virologiques sensibles
– Sensibilité : 10-15 UI/...
Raccourcissement de la
Durée de Traitement
RVR facteur prédictif de la RVS
Fried et al., EASL 2008, Journal of Hepatology, 48(Suppl.2): S5
N= 1383 (Analyse rétrospec...
Importance de la RVR
• Analyse rétrospective de patients infectés par un VHC de génotype 1
traités pendant 48 semaines par...
Traitement Court : Génotype 1
• Patients par un VHC de génotype 1
– ARN VHC < 600,000 IU/ml
– PegIFN-2b + ribavirine
– 24...
Traitement Court : Génotype 1
Zeuzem et al., J Hepatol 2006;44:97-103.
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Week 4 Week 12 Wee...
Jensen et al., Hepatology 2006;43:954-960
Traitement court : Génotype 1
0
20
40
60
80
100
%deRVS
Peg-IFN alpha 2a 180 µg/s...
Shiffman et al., EASL 2006.
Etude ACCELERATE : Génotypes 2/3
Stratégie diagnostique & suivi virologique
%RVS
p=<0.0001 p=0...
Rapid virological response
HCV RNA < 50 IU/ml at week 4
No rapid virological response
HCV RNA ≥ 50 IU/ml at week 4
Etude A...
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
14 weeks
24 weeks
%Sustainedvirologicalresponse
Dalgard et al., Hepatology 2008;47:35-42
...
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
12 weeks
24 weeks
%Sustainedvirologicalresponse
(Lagging et al., Hepatology 2008;47:1837-...
• Durée de traitement de 6 mois chez tous les
patients avec une RVR indépendamment du
génotype
• Raccourcissement de la du...
Allongement de la Durée de
Traitement
Traitement Long : Génotypes 2/3
• Older age
• Male gender
• High BMI
• Fibrosis ≥ F3
Stratégie diagnostique & suivi virolo...
Génotype 1 : Traitement Long
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
48 weeks
(n=230)
72 weeks
(n=225)
53% 54%
%SVR
Berg et al., ...
0
20
40
60
80
100
%deRVP
NS NS
NS
p=0.04
S 4 S 12 S 4 S 12
ARN VHC < 50 UI/ml ARN VHC ≥ 50 UI/ml
Berg et al., Gastroentero...
Résumé
Stratégie diagnostique & suivi virologique
• Allongement de la durée de traitement à
72 semaines améliore la RVS :
...
HEPATITE C : Résistance
aux Traitements
• Définition
– Propriétés intrinsèques des souches
virales qui s’opposent à l’action antivirale
des effecteurs ou à des mé...
• Résistance du VHC à la thérapie par
l’interféron
• Résistance du VHC à la ribavirine
• Résistance du VHC aux inhibiteurs...
• Résistance du VHC à la thérapie par
l’interféron
• Résistance du VHC à la ribavirine
• Résistance du VHC aux inhibiteurs...
PEG-IFN- 2a + ribavirine
(Fried et al., 2002)
PEG-IFN- 2b + ribavirine
(Manns et al., 2001)
Manns et al., Lancet 2001;35...
Facteurs
Viraux
Caractéristiques
de la maladie
Facteurs
d’Hôte
Traitement
ECHECS DU TRAITEMENT
Cinétique Virale sous Traitement
2nde phase
7 14 T(n)
Cutoff
1ère phase
1
0 1 2 3
2
3
4
5
6
7
Jours
Neumann et al., Scienc...
0
1
2
3
4
5
6
7
0 4 7 8 15 22 291-7-28
Cut-off tests qualitatifs
Cut-off tests quantitatifs
Génotype 4
Génotype 1
Génotype...
0
1
2
3
4
5
6
7
0 4 7 8 15 22 291-7-28
Cut-off tests qualitatifs
Cut-off tests quantitatifs
Génotype 4
Génotype 1
Génotype...
0
1
2
3
4
5
6
7
0 4 7 8 15 22 291-7-28
Cut-off tests qualitatifs
Cut-off tests quantitatifs
Génotype 4
Génotype 1
Génotype...
Viral Factors
Antiviral
resistance
Delayed
clearance
Longer
half-life of
infected cells
– Motif nucléotidique responsable de
cette différence de sensibilité ?
– Pas de sélection de mutations de
résistance, même...
• Résistance du VHC à la thérapie par
l’interféron
• Résistance du VHC à la ribavirine
• Résistance du VHC aux inhibiteurs...
Mécanismes d’Action
Hypothétiques de la RBV
Adapted from Lau et al., Hepatology 2002; 35: 1002-9.
Ribavirine
Ribavirine
Tr...
Pawlotsky et al., Gastroenterology 2004;126:703-14
-1.0
-0.5
0.0
0.5
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28
Mean HCV RNA ...
Semaines
*
*
*
*
*
* p<0.05
24 7260524830 36
RBV jusqu’à S52
Arrêt RBV à S24
Bronowicki et al., Gastroenterology 2006
Pour...
Prévention de la Rechute
(PROVE-2)
Résistance aux traitements
Hézode et al., en révision favorable.
T12/PR12
n/N=
T12/P12
...
• Ribavirin mechanisms of action in chronic
hepatitis C remain unknown
• Ribavirin direct antiviral effect is modest
and t...
• Résistance du VHC à la thérapie par
l’interféron
• Résistance du VHC à la ribavirine
• Résistance du VHC aux inhibiteurs...
Cibles Potentielles
des Inhibiteurs
Spécifiques
De Clercq., Nature Review Drug Discovery, 2007; 6: 1001-18
1. Attachement ...
Viral entry inhibitors
Hepatitis C immunoglobulin HCIg)
HCV-Ab 68 and Ab 65 (monoclonal Ab)
HCV RNA translation inhibitors...
sensible
résistant
sensible
résistant
Inhibiteur
résistant
sensible
Résistance aux traitements
Mécanismes de la Résistance...
sensible
résistant
Inhibiteur
résistant
sensible
Résistance aux traitements
Mécanismes de la Résistance
sensible
résistant...
sensible
résistant
Inhibiteur
résistant
sensible
Résistance aux traitements
Mécanismes de la Résistance
résistant trés fit...
De Clercq., Nature Review Drug Discovery, 2007; 6: 1001-18
Inhibiteurs en
Développement
Résistance aux traitements
• Inhibiteurs de la maturation de la
polyprotéine
– Anti-protéase NS3
• Telaprevir (VX-950)
• Boceprevir (SCH503039)
• ITM...
• Inhibiteurs de la maturation de la
polyprotéine
– Anti-protéase NS3
• Telaprevir (VX-950)
• Boceprevir (SCH503039)
• ITM...
Telaprevir (VX-950)
Boceprevir (SCH 503034)
ITMN 191
NS4B
p7
NS4A
Résistance aux traitements
Inhibiteurs de la Maturation
de la Polyprotéine
Résistance aux traitements
Mutations de Résistance aux
Inhibiteurs de NS3/4A
Compounds
Ciluprevir (BILN 2061)
Telaprevir (...
Résistance aux traitements
Mutations de Résistance aux
Inhibiteurs de NS3/4A
Compounds
Ciluprevir (BILN 2061)
Telaprevir (...
Résistance aux traitements
Mutations de Résistance aux
Inhibiteurs de NS3/4A
Compounds
Ciluprevir (BILN 2061)
Telaprevir (...
Résistance aux traitements
Mutations de Résistance aux
Inhibiteurs de NS3/4A
Compounds
Ciluprevir (BILN 2061)
Telaprevir (...
• A highly selective, reversible
peptidomimetic inhibitor of the HCV NS3-
4A serine protease
• IC50 of the order of 0.5 µM...
Welsch et al., Genome Biology 2008, 9(1): R16.1-R16.18.
Telaprevir
Reesink et al., Gastroenterology 2006, 131: 997-1002.
HCVRNAchangefrom
baseline(Log10IU/mL)
Days
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Reesink et al., Gastroenterology 2006, 131: 997-1002.
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Baseline
Place...
T54
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V36
Amino Acid Substitutions Associated
with Telaprevir Resistance
Sarrazin et al., Gastroenterlogy 2007, 13...
PROVE-2 Trial
Weeks
480 2412
Placebo + Peg-IFN2a + Ribavirin (RBV)
VX-950 750 mg q8h
+ Peg-IFN2a
+ RBV
VX-950 750 mg q8h...
Zeuzem et al., AASLD 2008, Abstract 243.
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Relapse Rate
Zeuzem et al., AASLD 2008, Abstract 243.
T12/PR12 and
T12/PR24 Combined
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PatientsWithVirolo...
Patients Receiving Telaprevir
and Peg-IFN 2a without RBV
• Among the 6 patients who received the
combination of telaprevir...
Patient 1: subtype 1a Patient 2: subtype 1a Patient 3: subtype 1a
Patient 4: subtype 1b Patient 5: subtype 1a Patient 6: s...
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R155K/N + A40T
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Patient ...
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C E
Patient 3
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SOC
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SOC
Quasispecies Analysis
Résistance aux traitements
Pt 1 Pt 2 Pt 3 Pt 4 Pt 5 Pt 6
R26K
V36L/M V36A
T42S
A40T A40T
T54S T54S T54A
Y56F
T91A
R155K R155K R155K/E R155T/A
G174S
O...
Location of the Amino Acid Changes
Résistance aux traitements
Location of the Amino Acid Changes
Résistance aux traitements
• Among the 9 patients who received the
triple combination of telaprevir, Peg-IFN2a
and RBV
– 7 patients achieved an SVR
...
Weeks
Patient 8
WT
L14F
WT
L14F + V36C
A
B C
A B
CV36C
*
*TVR + Peg-IFN + RBV for 6 weeks
Quasispecies Analysis
Résistance...
Cys36
D81
S139
H57
F43 C36
Val36
D81
S139
H57
F43 V36
3D Structure of the V36 Mutations
Résistance aux traitements
V36
Variants
N (%)
Fold-
change in
IC50
Relative replication capacity in
Huh7.5 cells (%)
WT 1.0 100
V36M 24 (10%) 7.7 77 ...
V36
Variants
N (%)
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IC50
Relative replication capacity in
Huh7.5 cells (%)
WT 1.0 100
V36M 24 (10%) 7.7 77 ...
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Variants
N (%)
Fold-
change in
IC50
Relative replication capacity in
Huh7.5 cells (%)
WT 1.0 100
V36M 24 (10%) 7.7 77 ...
100
5 10
50
100
FRET Technology
Telaprevir (µM)
WT
V36C
V36M
V36L V36
Variants
IC50 VX-950
(S.E.)
(µM) Fold-change
WT 0.6 ...
• Inhibiteurs de la maturation de la
polyprotéine
– Anti-protéase NS3
• Telaprevir (VX-950)
• Boceprevir (SCH503039)
• ITM...
Copyright © 2006 Merck & Co., Inc., Whitehouse Station, New Jersey, USA
A
NNI site A (Thumb/fingertips)
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Benzimidaz...
Copyright © 2006 Merck & Co., Inc., Whitehouse Station, New Jersey, USA
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Indoles
Benzimidaz...
Placebo
500 mg bid
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Traitement Suivi
Jours
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R7128 : Phase II
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-3
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0 PegIFN + RBV + placebo
PegIFN + RBV + R7128 500 mg bid
PegIF...
MK 7009
monotherapy
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0 50 90 130 170 210 250
Day
logIU/mL
LOQ
MK 7009
+ MK-608 Chimp A
Chimp B
Chimp C
SVR
Ol...
Prévention de la Résistance
• Réduire au maximum la réplication virale
• Augmenter la barrière pharmacologique
• Utiliser ...
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    1. 1. VIRUS DE L’HEPATITE C & Marqueurs Stéphane Chevaliez Centre National de Référence Des Hépatites B, C et delta Laboratoire de Virologie & INSERM U955 Hôpital Henri Mondor Université Paris XII Créteil
    2. 2. Virus de l’Hépatite C I. Aspects Virologiques
    3. 3. Virus de l’Hépatite C • Famille : Flaviviridae • Genre : Hepacivirus Phylogénie de la région codant la protéine NS5B Virus de l’Hépatite C et Marqueurs Adapted from Simmonds et al., 1999; 2001.
    4. 4. • Famille : Flaviviridae • Genre : Hepacivirus • Hôte naturel : Homme Virus de l’Hépatite C Bartenschalger et al., 2004. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    5. 5. Organisation Structurale Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    6. 6. Organisation Structurale Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    7. 7. Organisation Structurale Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    8. 8. Organisation Génomique Virus de l’Hépatite C et Marqueurs NS4A NS4B p7 Adapted from Tail et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
    9. 9. Régions 5’ et 3’NC Virus de l’Hépatite C et Marqueurs NS4A NS4B p7 Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
    10. 10. Site d’Entrée Interne du Ribosome Virus de l’Hépatite C et Marqueurs Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
    11. 11. From Department of Structural Biology, Stanford University Medical School, USA Site d’Entrée Interne du Ribosome Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    12. 12. Organisation Génomique Virus de l’Hépatite C et Marqueurs NS4A NS4B p7 Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
    13. 13. STÉATOSE ROS FIBROSE Activation des cellules étoilées Insulino- Résistance Cytokines (TNF, TGF, IL-8, FasL) Produits de la peroxydation lipidique Cytokines NF-kB TNF Nécro Inflammation Cytokines TGF Cytokines Réponse immunitaire TGF Capside TNF Génotype 3 Capside NS5A Adapted from Asselah et al., 2006 Protéine de Capside & Pathogenèse Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    14. 14. Piodi et al., Hepatology 2008, 48(1): 16-27. VHC génotype 1b
    15. 15. xy z Piodi et al., Hepatology 2008, 48(1): 16-27.
    16. 16. Glycoprotéines E1-E2 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs NS4A NS4B p7 Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
    17. 17. Glycoprotéines d’Enveloppe Virus de l’Hépatite C et Marqueurs Heijne et al., Nature Reviews Molecular cell Biology, 2006; 7: 909-918
    18. 18. Région HVR1 (27 amino-acides)  80% de divergence nucléotidique entre génotypes  Epitope majeur de neutralisation Timm et al., World J Gastroenterol 2007; 13(36)4808-4817. Région HVR1 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    19. 19. Protéine Non-structurale 3 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs NS4A NS4B p7 Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
    20. 20. 1 631189 Sérine protéase Hélicase/NTPase Protéine NS3 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    21. 21. Sérine protéase • Modulateur de la réponse interféron type I via les Toll-Like receptor (TLR3) Hélicase/NTPase Protéine NS3 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs 1 631189
    22. 22. Bode et al., 2007; Archives of Biochemistry and Biophysics, 462: 6254-265 Production d’IFN- en Réponse à une Infection Virale Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    23. 23. Bode et al., 2007; Archives of Biochemistry and Biophysics, 462: 6254-265 1. Clivage de TRIF 2. Clivage de CARDIF Inhibition de la Phosphorylation d’IRF3 par NS3 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    24. 24. Sérine protéase • Modulateur de la réponse interféron type I via les Toll-Like receptor (TLR3) • Cible de molécules antivirales  VX-950 (Telaprevir®, Vertex)  SCH503034 (Boceprevir®, Schering-Plough)  ITMN 191 (Intermune) Hélicase/NTPase Protéine NS3 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs 1 631189
    25. 25. OPM Database, University of Michigan, College of Pharmacy. Site actif (His57, Asp81, Ser139)
    26. 26. Telaprevir (VX-950) Boceprevir (SCH 503034) ITMN 191
    27. 27. Protéine NS4B Virus de l’Hépatite C et Marqueurs NS4A NS4B p7 Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
    28. 28. Complexe de Réplication Virus de l’Hépatite C et Marqueurs Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463.
    29. 29. ARN Polymérase ARN-dépendante Virus de l’Hépatite C et Marqueurs NS4A NS4B p7 Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
    30. 30. Lesburg et al., Nat struct Biol 1999, 6: 937-943; Bressanelli et al., Proc Natl Acad Sci USA 1999, 96: 13034-13039; Ago et al., Srructure Fold Des 1999, 7: 1417-1426. Polymérase Virale Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    31. 31. Réplication – Modèle du poliovirus . Virus à ARN monocaténaire de polarité positive De Clercq., Nature Review Drug Discovery, 2007; 6: 1001-18 Réplication Virale Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    32. 32. Copyright © 2006 Merck & Co., Inc., Whitehouse Station, New Jersey, USA A NNI site A (Thumb/fingertips) Indoles Benzimidazoles NNI site B (Thumb) Phe derivatives Thiophene-COOH Dihydroxypirones Pyranoindoles B NNI site C (Palm) Benzothiadiazine Acyl-pyrrolidine Proline sulfonamide Acrylic acid derivatives Active Site Allosteric GTP C 2’-methyl nucleosides 4’ azido-cytidine NNI site D (R200 hinge) Benzofurans A B C D Cibles des Molécules Antivirales Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    33. 33. Cycle Viral Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    34. 34. Cycle Viral Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    35. 35. Modèle d’Entrée Virale Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    36. 36. Cycle Viral Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    37. 37. Maturation de la Polyprotéine Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    38. 38. Structure des Protéines NS Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    39. 39. Cycle Viral Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    40. 40. Complexes de Réplication Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    41. 41. Cycle Viral Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    42. 42. Virus de l’Hépatite C II. Modèles d’Etude
    43. 43. Souris transgéniques Souris SCID/uPA Modèles Animaux Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    44. 44. Visualisation des cellules Huh7 infectées 3 - Vecteur de transfert de la GFP 2 - Expression des glycoprotéines E1E2 du VHC 1 - Expression de Gag-Pol de MLV Co-transfection des cellules 293 T Production de ppVHC infectieuses Infection in vitro des cellules Huh7 Pseudoparticules Rétrovirales (HCVpp) Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    45. 45. A B Adapted from Nature Review Drug Discovery, 2002; 1:911-916 Réplicons Subgénomiques Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    46. 46. Adapted from www.molecular-virology.uni-hd.de Système Productif (HCVcc) Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    47. 47. Virus de l’Hépatite C III. Variabilité Génétique
    48. 48. Virus de l’hépatite C Production virale (/24 heures) 1012 T1/2 virus libre (heures) 2 - 3 T1/2 brin ARN (heures) ~10 Taux de mutation Très élevé Mutants d’échappement au SI Fréquent Cellules cibles Taille du compartiment Probablement grande Soriano et al., J Antimicro Chemother 2008, 62: 1-4 Dynamique Virale Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    49. 49. • Erreurs au cours de la réplication – Fréquentes . 10-4 -10-4 mutations par nucléotide copié au cours de la réplication du VHC – Spontanées – Au hasard • Absence d’activité exonucléasique 3’5’ ("proofreading") – Accumulation de mutations • A l’origine de : – La diversification des types et des sous-types – La distribution en quasi-espèces ARN Polymérase ARN-dépendante Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    50. 50. Simmonds et al. Hepatology 2005. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs Diversification des Génotypes
    51. 51. 7 Central Africa Murphy et al., AASLD, Hepatology, 2007. Diversification des Génotypes Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    52. 52. • Facteur prédictif de la réponse au traitement • Conditionne – La dose de ribavirine (800 - 1400 mg) – La durée de traitement (16 - 72 semaines) Virus de l’Hépatite C et Marqueurs Génotypes
    53. 53. Weiner et al., Virology 1991; 180:842-848; Martell et al., J Virol 1992;66:3225-36. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs Distribution en Quasi-espèce
    54. 54. • Dérive génétique – Accumulation de mutations ponctuelles • Glissement génétique – Suite à la modification brutale de l’environnement réplicatif Virus de l’Hépatite C et Marqueurs Mécanismes d’Evolution de la Quasi-espèce
    55. 55. • Joue un rôle dans le maintien de l’infection chronique • Joue un rôle dans l’échec des traitements antiviraux • Joue un rôle dans la sévérité de la maladie Farci P, 2000; Science, 288: 339-344; Lavillette D, 2005; Journal of Virology, 79(10): 6023-6034; Farci P, 2002; PNAS, 99: 3081-3086; Chambers TJ et al., 2005; 79: 3071-3083; Sullivan et al., JID 2007, 196: 239-248. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs Distribution en Quasi-espèce
    56. 56. Virus de l’Hépatite C IV. Exemples d’Application de la Variabilité Génétique
    57. 57. • Diversification et diffusion du VHC • Transmission du VHC • Mécanismes de persistance et d’infection du VHC • Compartimentation tissulaire du VHC • Mécanisme d’échec thérapeutique et de résistance Impacts de la Variabilité Génétique du VHC Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    58. 58. • Diversification et diffusion du VHC • Transmission du VHC • Mécanismes de persistance et d’infection du VHC • Compartimentation tissulaire du VHC • Mécanisme d’échec thérapeutique et de résistance Impacts de la Variabilité Génétique du VHC Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    59. 59. 7 Central Africa Murphy et al., AASLD, Hepatology, 2007. Diversification des Génotypes Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    60. 60. Génotype & Mode de Transmission 52% 54% 63% 0% 20% 40% 60% 80% 100% UDVI Transfusion Autres 3 1b 1a Autres Pawlotsky et al., J Infect Dis, 1995; 171(6): 1607-10. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    61. 61. 27% 39% 36% 0% 20% 40% 60% 80% 100% UDVI Transfusion Autres 4 3 2 1b 1a 1nt Payan et al., J Viral Hepat 2005;12: 405-13. Génotype & Mode de Transmission Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    62. 62. Génotype 3a Chez les UDVI 0.1 substitution per site JK049 TrKj NE125 NE048 HCV-3a HCV-3f HCV-3c HCV-3b HCV-3k Australie USA, Côte Ouest Argentine Brézil France USA, Côte Est 75 72 83 79 100 92 60 62 81 63 98 98 99 62 52 71 95 56 Morice et al., J Med Virol 2006;78:1296-1303. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    63. 63. • Diversification et diffusion du VHC • Transmission du VHC • Mécanismes de persistance et d’infection du VHC • Compartimentation tissulaire du VHC • Mécanisme d’échec thérapeutique et de résistance Impacts de la Variabilité Génétique du VHC Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    64. 64. • Mise en évidence d’une séroconversion VHC lors du dépistage et du suivi des patients hémodialysés en juillet 2005, à l’hôpital Henri Mondor • L’ensemble des patients hémodialysés ont été testés (anticorps anti-VHC et ARN viral) – Mise en évidence d’un 2nd cas au cours de la même période • Analyses génétique et phylogénique • Recherche du VHC dans l’environnement – Supports et surfaces inertes Transmission Nosocomiale "Mondorienne" Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    65. 65.  Identification de deux cas de séroconversion en 2004 au sein de l’unité d’hémodialyse de l’hôpital Henri Mondor : – Patient "1" infecté par un génotype 3a – Patient "2" infecté par un génotype 1 Transmission Nosocomiale "Mondorienne" Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    66. 66. 1h_FrSSD98 1h_98CM1521 1h_98CM1357 1f_FR2 1i_FR16 1i_QC77 1iQC181 1m_GUI17 1m_GUI11 1m_GUI24 1d_HC1N16 1d_BA107 1d_FR17 Patient 8 1b_HCJ4 Patient 7 Patient 6 Patient 5 Patient 4 1b_HCP01 1b_HCVBK 1c_HCG9 1c_SR031 1c_Khaja1 1l_M5186N 1l_98CM1427 1l_98CM1457 1e_M4541N 1e_CAM1078 1e_QC172 1g_1382 1g_2152 1g_EG024 1a_HCV1 1a_HCVH 1a_HCJ1 1j_QC2 1j_QC89 1k_QC68 1k_QC82 Patient 3 Patient 2* Patient 2** 2a_HCJ6 5a_SA13 6a_EUHK2 Patient 1 3a_NLZ1 4a_ED43 0.05 Genotype 4 Genotype 3 Genotype 6 Genotype 5 Genotype 2 Genotype 1 100 100 100 Patients VHC chronique Séroconversion VHC Girou et al., Clin Infect Disease 2008, 47(5): 627-633. G1 Analyse Phylogénique Région NS5B (329 nt) CLUSTALX DNADist (PHYLIP 3.5) Matrice de distance: Kimura 2-parameter (Ts/Tv=2) Neighbor-Joining Bootstraping : 1000 replicates NJPlot Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    67. 67. 6a_33 2b_JFH1 Patient 1 (7/04) 5a_SA13 1b_HVR3812 S5 (7/05) Patient 3 (7/05) Patient 3 (9/05) Patient 2 (7/04) Patient 2 (9/04) Patient 3 (7/04) S4 (6/05) S3 (6/05) S2 (6/05) Patient 3 (01/05) S1 (6/05) 1a_HCT27X5 2a_Q2B 3a_CB 1a_HCT18X5 Patient 6 1b_AWV2C33 Patient 8 Patient 4 Patient 7 4a_ED43 0.2 100 Girou et al., Clin Infect Disease 2008, 47(5): 627-633. Patients VHC chronique Séroconversion VHC Analyse Phylogénique Région HVR1 (81 nt) CLUSTALX DNADist (PHYLIP 3.5) Matrice de distance: Kimura 2-parameter (Ts/Tv=2) Neighbor-Joining Bootstraping : 1000 replicates NJPlot Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    68. 68. 6a_33 2b_JFH1 Patient 1 (7/04) 5a_SA13 1b_HVR3812 S5 (7/05) Patient 3 (7/05) Patient 3 (9/05) Patient 2 (7/04) Patient 2 (9/04) Patient 3 (7/04) S4 (6/05) S3 (6/05) S2 (6/05) Patient 3 (01/05) S1 (6/05) 1a_HCT27X5 2a_Q2B 3a_CB 1a_HCT18X5 Patient 6 1b_AWV2C33 Patient 8 Patient 4 Patient 7 4a_ED43 0.2 100 Surfaces inertes Girou et al., Clin Infect Disease 2008, 47(5): 627-633. Patients VHC chronique Séroconversion VHC Région HVR1 (81 nt) CLUSTALX DNADist (PHYLIP 3.5) Matrice de distance: Kimura 2-parameter (Ts/Tv=2) Neighbor-Joining Bootstraping : 1000 replicates NJPlot Analyse Phylogénique Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    69. 69. • Screening de 64 patients hémodialysés à l’hôpital Hubert Kutuku Maga, Cotonou, Bénin (Afrique) – Détection anticorps anti-VHC – Détection ARN VHC (limite détection <50UI/mL) • Etude génétique et phylogénique de deux régions distinctes du génome viral – NS5B – Core-E1 Transmission Nosocomiale au Bénin Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    70. 70. Analyse Phylogénique 5aSA13 2aHCJ6 Patient 49 6aEUHK2 3aNLZ1 Patient 62 4aED43 1hFrSSD98 1h98CM1357 1h98CM1521 1cHCG9 1cSR031 1cKhaja1 1aHCV1 1aHCVH 1aHCJ1 1jQC2 1jQC89 1kQC68 1kQC82 1eM4541N 1eCAM1078 1eQC172 1g1382 1g2152 1gEG024 1lM5186N 1l98CM1427 1l98CM1457 1fFR2 Patient 59 Patient 46 Patient 54 Patient 2 Patient 28 Patient 64 Patient 16 Patient 36 Patient 18 Patient 17 Patient 8 Patient 7 1bHCJ4 1bHCVBK 1bHCP01 Patient 40 1iFR16 1iQC77 1iQC181 Patient 48 Patient 60 Patient 52 Patient 26 1dFR17 1dHC1N16 1dBA107 1mGUI17 1mGUI11 1mGUI24 0.05 59 99 96 34 100 72 100 98 43 Région NS5B (286 nt) CLUSTALX DNADist (PHYLIP 3.5) Matrice de distance: Kimura 2- parameter (Ts/Tv=2) Neighbor-Joining Bootstraping : 1000 replicates NJPlot Génotype 2 Génotype 4 Génotype 3 Génotype 1 Génotype 6 Génotype 2 Génotype 5 Génotype 1, sous-type b Génotype 3, sous-type a Génotype 1, sous-type i Génotype 1, sous-type ? 100 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    71. 71. Transmissions Nosocomiales Région HVR1 (81 nt) CLUSTALX DNADist (PHYLIP 3.5) Matrice de distance: Kimura 2- parameter (Ts/Tv=2) Neighbor-Joining NJPlot 2aQ2B 3aCB 2bJFH1 1aHCT18X5 6a33 4aED43 1aHCT27X5 Patient 7 Patient 8 Patient 16 Patient 18 Patient 17 Patient 2 Patient 28 Patient 64 Patient 54 Patient 46 5aSA13 Patient 59 Patient 52 Patient 48 Patient 60 1bAWV2C33 1bHVR3812 0.2 Patient 26 Patient 40 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    72. 72. MAXIMUM DE VRAISEMBLANCE Assignation Provisoire d’un Nouveau Sous-type : Etude de la région NS5B Patient 16 Patient 18 Patient 17 Patient 8 Patient 7 Patient 64 Patient 46 1f_L38350 1e_AY894555 1g_AF271822 1g_AF271820 1d_L39302 1d_L39299 1b_M58335 1b_D90208 1i_AY434119 1h_AY434131 1j_AY434158 1j_AY434128 1k_AY434122 1k_AY434112 1a_M67463 1a_M62321 1c_D14853 1c_AY051292 0.05 PARCIMONIE Patient 16 Patient 18 Patient 17 Patient 7 Patient 8 Patient 64 Patient 46 1f_L38350 1h_AY434131 1i_AY434119 1d_L39302 1d_L39299 1b_M58335 1b_D90208 1e_AY894555 1g_AF271822 1g_AF271820 1j_AY434158 1j_AY434128 1k_AY434122 1k_AY434112 1a_M67463 1a_M62321 1c_D14853 1c_AY051292 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    73. 73. MAXIMUM DE VRAISEMBLANCE Assignation Provisoire d’un Nouveau Sous-type : Etude de la région Core-E1 PARCIMONIE Patient 7 Patient 64 Patient 46 Patient 18 Patient 16 Patient 17 Patient 8 1h_AY434132 1h_AY257087 1d_L38377 1i_AY434120 1i_L48495 1b_M58335 1b_L38372 1b_D90208 1f_L38371 1l_AY257091 1l_AY257083 1c_AY051292 1c_D14853 1g_AF271797 1g_AF271798 1e_AY894553 1e_L38361 1k_AY434123 1k_AY434113 1j_AY434129 1j_AY434106 1a_M67463 1a_M62321 0.02 Patient 64 Patient 46 Patient 18 Patient 16 Patient 17 Patient 7 Patient 8 1d_L38377 1i_AY434120 1i_L48495 1b_D90208 1b_L38372 1b_M58335 1l_AY257091 1l_AY257083 1c_AY051292 1c_D14853 1g_AF271797 1g_AF271798 1e_AY894553 1e_L38361 1k_AY434123 1k_AY434113 1j_AY434129 1j_AY434106 1a_M67463 1a_M62321 1f_L38371 1h_AY434132 1h_AY257087 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    74. 74. • Epidémie à VHC au sein d’une unité d’hémodialyse en Grèce ("Papageorgiou General Hospital", Thessaloniki) • 17 patients hémodialysés contaminés en quelques mois • Analyses génétique et phylogénique • Etude de la réponse neutralisante – Système HCVpp Lavillette et al., J Virol 2005;79:6023-34 Transmission Nosocomiale en Grèce Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    75. 75. 0,1 substitution per site HCV-1 HCV-H SR052 HC-G9 SR037 HC-J4 HCV-BK BE90 Pt-11 Pt-10 Pt-9 Pt-5 Pt-12 Pt-13 Pt-15 Pt-16 Pt-2 Pt-4 Pt-3 Pt-1 Pt-17 Pt-7 Pt-6 Pt-8 1b HCV-1 1a 1c Souche B Souche A Analyse Phylogénique Lavillette et al., J Virol 2005;79:6023-34 Région HVR1 (81 nt) CLUSTALX DNADist (PHYLIP 3.5) Matrice de distance: Kimura 2- parameter (Ts/Tv=2) Neighbor-Joining NJPlot Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    76. 76. Incubation HCVpp avec des dilutions de sérum Détermination de l’infectivité (bruit de fond) Détermination de l’activité neutralisante du sérum Infection de cellules Huh7 Pseudoparticules Rétrovirales (HCVpp) Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    77. 77. Patient-10 (souche B) ARN VHC (UI/mL) Semaines % neutralisation infection Huh7 ARN VHC Réponse Neutralisante ALAT Contrôle Neutralisation • Absence de réponse neutralisante et absence de contrôle de l’infection Lavillette et al., J Virol 2005;79:6023-34 Réponse Neutralisante - Groupe 1 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    78. 78. • Réponse neutralisante forte et spécifique • Réponse neutralisante inversement proportionnelle à la cinétique de la charge virale Patient-1 (souche A) % neutralisation infection Huh7 Réponse Neutralisante - Groupe 2 ARN VHC (UI/mL) Semaines ARN VHC Réponse Neutralisante ALAT Contrôle Neutralisation Lavillette et al., J Virol 2005;79:6023-34 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    79. 79. • Diversification et diffusion du VHC • Transmission du VHC • Mécanismes de persistance et d’infection du VHC • Compartimentation tissulaire du VHC • Mécanisme d’échec thérapeutique et de résistance Impacts de la Variabilité Génétique du VHC Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    80. 80. Histoire Naturelle Hépatite Aiguë Hépatite Chronique 50 - 85% Cirrhose 20 - 30% Décompensation 6 - 10% HCC 4 - 5% par an Mortalité 10-30ans Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    81. 81. Histoire Naturelle Hépatite Aiguë Hépatite Chronique 50 - 85% Cirrhose 20 - 30% Décompensation 6 - 10% HCC 4 - 5% par an Mortalité 10-30ans Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    82. 82. Persistance Virale • Persistance virale – Echec de la réponse immune, pourtant présente et adaptée, à éliminer le virus ou les cellules qui l’abritent • Interface complexe Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    83. 83. Processus Multi-étape Hépatite Aiguë Infection Chronique Hépatite Chronique 50 - 85% 1. Mise en place de l’infection aiguë 2. Etablissement de la persistance virale 3. Maintient de l’infection au cours du temps Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    84. 84. Hépatite Aiguë Infection Chronique Hépatite Chronique 50 - 85% 1. Mise en place de l’infection aiguë 2. Etablissement de la persistance virale ? 3. Maintient de l’infection au cours du temps Processus Multi-étape Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    85. 85. Adapted from Ferrari C, Gasroenterology 2007; 132(2): 801-805 Persistance du VHC Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    86. 86. • Diversification et diffusion du VHC • Transmission du VHC • Mécanismes de persistance et d’infection du VHC • Compartimentation tissulaire du VHC • Mécanisme d’échec thérapeutique et de résistance Impacts de la Variabilité Génétique du VHC Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    87. 87. Roque-Afonso et al., J Virol 2005;79:6349-57) Région 5’NC Région E1-E2 Compartimentation Plasma-PBMC Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    88. 88. • Diversification et diffusion du VHC • Transmission du VHC • Mécanismes de persistance et d’infection du VHC • Compartimentation tissulaire du VHC • Mécanisme d’échec thérapeutique et de résistance Impacts de la Variabilité Génétique du VHC Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
    89. 89. HEPATITE C : Stratégie Diagnostique & Suivi Virologique
    90. 90. Virus de l’Hépatite C I. Cinétique des Marqueurs Virologiques
    91. 91. Marqueurs Virologiques Stratégie diagnostique & suivi virologique Marqueurs indirects Anticorps anti-VHC totaux Marqueurs directs ARN VHC Génotype VHC
    92. 92. Cinétique des Marqueurs ARN VHC Symptômes +/- Temps après contage (mois) Titre Anti-VHC ALAT Normal 0 1 2 3 4 5 6 12 24 36 48 Infection Aiguë Stratégie diagnostique & suivi virologique
    93. 93. Cinétique des Marqueurs ARN VHC Symptômes +/- Temps après contage (mois) Titre Anti-VHC ALAT 0 1 2 3 4 5 6 12 24 36 48 Infection Chronique Normal Stratégie diagnostique & suivi virologique
    94. 94. Virus de l’Hépatite C II. Tests Virologiques
    95. 95. Tests Virologiques Moléculaires Tests quantitatifs Seuil de détection ≥ qualitatifs Quelle quantité est présente ? Tests qualitatifs Très sensibles ( 50 IU/mL) Est-ce que le VHC est présent ? Stratégie diagnostique & suivi virologique Détermination du Génotype Quel type de VHC est présent ?
    96. 96. Tests Virologiques Moléculaires Stratégie diagnostique & suivi virologique Est-ce que le VHC est présent et en quelle quantité ? Détermination du Génotype Quel type de VHC est présent ? Tests Quanti-Qualitatifs
    97. 97. Détection-Quantification de l’ARN VHC
    98. 98. Intérêts de la Détection - Quantification de l’ARN VHC • Evaluation de la réplication virale chez des patients anticorps anti-VHC positifs • Evaluation de la réponse virologique au cours du traitement pegIFN - RBV – Réponse virologique rapide (semaine 4) – Réponse virologique précoce (semaine 12) – Réponse fin de traitement (EOT) – Réponse virologique soutenue (semaine 24 post-Rx) Stratégie diagnostique & suivi virologique
    99. 99. Techniques Disponibles b-DNA PCR Branched DNA Polymerase chain reaction Amplification du signal Amplification de la cible Quantitative Quantitative Stratégie diagnostique & suivi virologique
    100. 100. Principe des Techniques b-DNA PCR Branched DNA Polymerase chain reaction Amplification du signal Amplification de la cible Quantitative Quantitative Stratégie diagnostique & suivi virologique
    101. 101. bDNA : Principe ARN VHC Capture Probe Capture Extender Label extender Preamplifier Amplifier with hybridized label probe Adapted from Siemens Stratégie diagnostique & suivi virologique
    102. 102. bDNA : Forces & Faiblesses • Forces – Quantification indépendante du génotype – Tolérance de polymorphismes nucléotidiques – Faible volume de prise d’essai – Large intervalle de quantification linéaire . ≥ 6.90 Log10 UI/mL • Faiblesses – Faible sensibilité . LLOD: 2.80 Log10 UI/mL – Faux positifs dans les faibles valeurs – Méthode semi-automatisée (Siemens system 340 analyzer) – 12 contrôles par run Stratégie diagnostique & suivi virologique
    103. 103. Principe des Techniques b-DNA PCR Branched DNA Polymerase chain reaction Amplification du signal Amplification de la cible Quantitative Quantitative Stratégie diagnostique & suivi virologique
    104. 104. PCR : Principe VHC ARN ADNc Amplicons (ADNdb) Stratégie diagnostique & suivi virologique
    105. 105. Avantages Techniques de la PCR en temps réel • Diminution du risque de contamination • Amélioration de la sensibilité • Augmentation de l’intervalle de quantification linéaire • Amélioration précision et reproductibilité • Augmentation de débit à travers l’automatisation • Diminution des coûts Stratégie diagnostique & suivi virologique
    106. 106. 10 102 103 104 105 106 107 108 Cobas Amplicor HCV Monitor v2.0 SuperQuant LCx HCV RNA Assay Versant HCV RNA 3.0 (bDNA) Intervalle de Quantification Stratégie diagnostique & suivi virologique
    107. 107. 10 102 103 104 105 106 107 108 Cobas Amplicor HCV Monitor v2.0 SuperQuant LCx HCV RNA Assay Versant HCV RNA 3.0 (bDNA) TaqMan 48 HCV (Roche) HCV Quant ASR (Abbott) Versant HCV RNA 1.0 (kPCR, Siemens)* *en développement Intervalle de Quantification Stratégie diagnostique & suivi virologique
    108. 108. • Diminution du risque de contamination • Amélioration de la sensibilité • Augmentation de l’intervalle de quantification linéaire • Amélioration précision et reproductibilité • Augmentation de débit à travers l’automatisation • Diminution des coûts Stratégie diagnostique & suivi virologique Avantages Techniques de la PCR en temps réel
    109. 109. Plates-formes CAP-CTM96 (ROCHE) kPCR (SIEMENS) m2000SP-m2000RT (ABBOTT) Stratégie diagnostique & suivi virologique
    110. 110. • Remplace les techniques qualitatives de détection de l’ARN VHC • Quantifie l’ensemble des charges virales observées en pratique clinique – Faibles charges virales au cours du traitement • Surveille efficacement les cinétiques virales (évaluation précoce des réponses virologiques au traitement) Stratégie diagnostique & suivi virologique Avantages Cliniques de la PCR en temps réel
    111. 111. Quantification de l’ARN du VHC CAP-CTM48 (Roche) versus bDNA 3.0 (Siemens) DifferencebetweenHBVDNAlevelsmeasuredin CAP/CTMandinbDNA(inLog10IU/mL) 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 -1.5 1.0 -1.0 1.5 0.0 0.5 -0.5 Mean of HCV RNA levels measured in CAP/CTM and bDNA (in Log10 UI/mL) Genotype 1 (n=29) Genotype 2 (n=27) Genotype 3 (n=29) Genotype 4 (n=30) Genotype 5 (n=9) Genotype 6 (n=2) Chevaliez et al., 2007; Hepatology, 46(1): 22-31. Mean difference + 1.96 mean difference - 1.96 mean difference Stratégie diagnostique & suivi virologique
    112. 112. Différences de Quantification Chevaliez et al., 2007; Hepatology, 46(1): 22-31. Genotype 1 (n=29) Genotype 2 (n=27) Genotype 3 (n=29) Genotype 4 (n=30) Genotype 5 (n=9) Genotype 6 (n=2) -1.5 1.0 -1.0 1.5 0.0 0.5 -0.5 15% 30% DifferencebetweenHCVRNAlevelsmeasuredin CAP/CTMandinbDNA(inLog10UI/mL) CAP-CTM48 (Roche) versus bDNA 3.0 (Siemens) Stratégie diagnostique & suivi virologique
    113. 113. Chevaliez et al., manuscript in preparation. m2000SP-m2000RT (Abbott) versus bDNA 3.0 (Siemens) Mean of HCV RNA levels measured in m2000SP/m2000RT and bDNA (in Log10IU/mL) 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 -1.5 1.0 -1.0 1.5 0.0 0.5 -0.5 DifferencebetweenHCVRNAlevelsmeasuredin m2000SP/m2000RTandinbDNA(inLog10IUI/mL) Mean difference + 1.96 mean difference - 1.96 mean difference Genotype 1 (n=55) Genotype 2 (n=21) Genotype 3 (n=29) Genotype 4 (n=24) Genotype 5 (n=9) Genotype 6 (n=3) Quantification de l’ARN du VHC Stratégie diagnostique & suivi virologique
    114. 114. David Sherman., Molecular Symposium, September 2007 (source: Siemens Medical Solutions Diagnostics). kPCR HCV 1.0 (Siemens) versus bDNA 3.0 (Siemens) 132 clinical samples Quantification de l’ARN du VHC Stratégie diagnostique & suivi virologique
    115. 115. Détermination du Génotype
    116. 116. Génotypes du VHC Simmonds et al. Hepatology 2005; Murphy et al., AASLD, Hepatology, 2007. 7 Central Africa Stratégie diagnostique & suivi virologique
    117. 117. Intérêts de la Détermination du Génotype • Détermination systématique du génotype – Facteur prédictif de la réponse au traitement – Conditionne • La dose de ribavirine • La durée du traitement (24 vs 48 semaines) Stratégie diagnostique & suivi virologique
    118. 118. Détermination du Génotype • Détermination moléculaire du génotype VHC (génotypage) • Détermination sérologique du génotype VHC (“sérotypage”) Stratégie diagnostique & suivi virologique
    119. 119. Détermination du Génotype • Détermination moléculaire du génotype VHC (génotypage) • Détermination sérologique du génotype VHC (“sérotypage”) Stratégie diagnostique & suivi virologique
    120. 120. Cibles pour le Génotypage NS4A NS4B p7 Adapted from Tail et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881 Stratégie diagnostique & suivi virologique
    121. 121. Cibles pour le Génotypage NS4A NS4B p7 Adapted from Tail et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881 Stratégie diagnostique & suivi virologique
    122. 122. Méthodes de Génotypage • Séquençage direct des produits d’amplification1 • Restriction fragment length polymorphism analysis (RFLP)2 • Hybridation inverse des produits d’amplification sur support solide : Line Probe Assay (INNO-LiPA HCV, Innogenetics)3 • Autres méthodes : – Single-strand conformation polymorphism analysis (SSCP)4 – Spectrométrie de masse MALDI-TOF après miniséquençage5 1Arens et al., J Clin Virol, 2001; 22:11-29.; 2Davidson et al., J Gen Virol 1995; 76: 1197-204; 4Lareu et al., 1997; 3Le Pogam et al., 1998; J Clin Microbiol; 36: 1461-3; Ilina et al., J Clin Miocrobiol, 2005; 43(6): 2810-15 Stratégie diagnostique & suivi virologique
    123. 123. Méthodes de Génotypage • Séquençage direct des produits d’amplification1 • Restriction fragment length polymorphism analysis (RFLP)2 • Hybridation inverse des produits d’amplification sur support solide : Line Probe Assay (INNO-LiPA HCV, Innogenetics)3 • Autres méthodes : – Single-strand conformation polymorphism analysis (SSCP)4 – Spectrométrie de masse MALDI-TOF après miniséquençage5 1Arens et al., J Clin Virol, 2001; 22:11-29.; 2Davidson et al., J Gen Virol 1995; 76: 1197-204; 4Lareu et al., 1997; 3Le Pogam et al., 1998; J Clin Microbiol; 36: 1461-3; Ilina et al., J Clin Miocrobiol, 2005; 43(6): 2810-15 Stratégie diagnostique & suivi virologique
    124. 124. Versant® HCV Genotype 2.0 Assay 3 17 15 20 21 23. AC Marker CC AC 4 5 10 12 24. 6 c-l 16 2b 3a 4b 6a1b 6c-l1a 6 7 8 9 11 13 14 18 19 25. 1a 25. 1b 5’UTR Same bands as the 1.0 version Core region Stratégie diagnostique & suivi virologique
    125. 125. Importance de la Région Virale pour la Détermination du Sous-type Analyse phylogénique de la région 5’NC 1ère génération de Line probe assay (LiPA1.0) 2ème génération de Line probe assay (LiPA2.0) PCR en temps réel 1a (n=233) 80,3% (n=187) 73,0% (n=170) 98,3% (n=229) 94,4% (n=220) 1b (n=253) 94,1% (n=238) 91,7% (n=232) 98,0% (n=248) 93,3% (n=236) Chevaliez et al., EASL 2009. Stratégie diagnostique & suivi virologique
    126. 126. Virus de l’Hépatite C III. Diagnostic Virologique
    127. 127. Diagnostic de l’Infection Aiguë Ac anti-HCV - - + + ARN VHC* - + - + * Technique sensible seuil de détection ≤ 50 IU/ml Diagnostic Absence d’infection aiguë Infection aiguë C Probablement pas d’infection aiguë Difficile de conclure Stratégie diagnostique & suivi virologique
    128. 128. Diagnostic de l’Infection Chronique • Détection des anticorps anti-VHC totaux par ELISA • Recherche d’ARN du VHC par un test sensible* • Détection d’ARN du VHC* si le test ELISA (- ) chez des patients hémodialysés ou immunodéprimés * Technique sensible seuil de détection ≤ 50 IU/ml Stratégie diagnostique & suivi virologique
    129. 129. Virus de l’Hépatite C III. Prise en Charge Thérapeutique
    130. 130. Intérêts des Tests Virologiques en Thérapeutique Consensus conference: treatment of hepatitis C; 2002, Gastroenterol Clin Biol, 26(2): B303-20 • Décision de traiter • Optimisation du schéma thérapeutique • Etude de la réponse virologique au traitement Stratégie diagnostique & suivi virologique
    131. 131. Classification des Patients Type 1 Types 2, 3 Types 4, 5, 6 Génotypes VHC Consensus conference: treatment of hepatitis C; 2002, Gastroenterol Clin Biol, 26(2): B303-20 Stratégie diagnostique & suivi virologique
    132. 132. Indications Actuelles du Traitement • Patients infectés par un VHC de génotype 1 – Interferon pégylé plus ribavirine (1000 - 1400 mg/j) – Durée : 48 semaines • Patients infectés par un VHC de génotype 2/3 – Interferon pégylé plus ribavirine (800 mg/j) – Durée : 24 semaines • Patients infectés par une VHC de génotype 4, 5 et 6 – Interferon pégylé plus ribavirine (1000 - 1400 mg/j) – Durée : 48 semaines Stratégie diagnostique & suivi virologique
    133. 133. Génotype VHC VHC-1 (4,5,6) Quantification ARN VHC-2,3 Bithérapie 24 semaines Ribavirine 800 mg Bithérapie 48 semaines Ribavirine 1000-1400 mg Quantification ARN à S12 Diminution < 2 Log Diminution  2 Log ARN VHC + Arrêt traitement poursuite avec IFN pégylé pour ralentir la progression de la maladie hépatique Poursuite jusqu’à S24 Si ARN VHC - Poursuite jusqu’à S48 diminution  2 Log ARN VHC - Poursuite jusqu’à S48
    134. 134. Optimisation du Traitement en Fonction de la Réponse Virologique • Outils virologiques sensibles – Sensibilité : 10-15 UI/mL – Evaluation de la réponse au traitement • Répondeurs virologiques rapides – Raccourcissement de la durée de traitement • Répondeurs virologiques précoces partiels – Allongement de la durée de traitement Stratégie diagnostique & suivi virologique
    135. 135. Raccourcissement de la Durée de Traitement
    136. 136. RVR facteur prédictif de la RVS Fried et al., EASL 2008, Journal of Hepatology, 48(Suppl.2): S5 N= 1383 (Analyse rétrospective) Stratégie diagnostique & suivi virologique
    137. 137. Importance de la RVR • Analyse rétrospective de patients infectés par un VHC de génotype 1 traités pendant 48 semaines par pegIFN alfa-2a + RBV (N = 453) ARN VHC Positif À S24 4 12 24 Semaine ARN négatif 91 66 45 2 Ferenci P, et al. J Hepatol. 2005;43:425-433. 20 40 60 80 100 RVS(%) 0 Stratégie diagnostique & suivi virologique
    138. 138. Traitement Court : Génotype 1 • Patients par un VHC de génotype 1 – ARN VHC < 600,000 IU/ml – PegIFN-2b + ribavirine – 24 semaines de traitement – Comparaison des données obtenus avec les résultats de l’étude pivot (Mann et al., Lancet 2001) Zeuzem et al., J Hepatol 2006;44:97-103. Stratégie diagnostique & suivi virologique
    139. 139. Traitement Court : Génotype 1 Zeuzem et al., J Hepatol 2006;44:97-103. 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Week 4 Week 12 Week 24 24 weeks 48 weeks (Mann et al., 2001) Time to first negative HCV RNA (< 50 IU/ml) %SVR Stratégie diagnostique & suivi virologique
    140. 140. Jensen et al., Hepatology 2006;43:954-960 Traitement court : Génotype 1 0 20 40 60 80 100 %deRVS Peg-IFN alpha 2a 180 µg/semaine + RBV 800 ou 1000-1200 mg/j ARN VHC > 50 UI/mL à S4 24-DF 24-DS 48-DF 48-DS 73% 89% 88% 91% ARN VHC < 50 UI/mL à S4 44% 23% 35% 16% Stratégie diagnostique & suivi virologique
    141. 141. Shiffman et al., EASL 2006. Etude ACCELERATE : Génotypes 2/3 Stratégie diagnostique & suivi virologique %RVS p=<0.0001 p=0.1565 65% 82% 65% 71%
    142. 142. Rapid virological response HCV RNA < 50 IU/ml at week 4 No rapid virological response HCV RNA ≥ 50 IU/ml at week 4 Etude ACCELERATE : Génotypes 2/3 Stratégie diagnostique & suivi virologique Shiffman et al., EASL 2006. 82% 90% 27% 49% SVR rate SVR rate
    143. 143. 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 14 weeks 24 weeks %Sustainedvirologicalresponse Dalgard et al., Hepatology 2008;47:35-42 RVR (HCV RNA < 50 IU/ml at week 4) 93% 84% Genotype 2 Genotype 3 92% 97% Traitement court : Génotypes 2/3 Stratégie diagnostique & suivi virologique PegIFN-2b
    144. 144. 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 12 weeks 24 weeks %Sustainedvirologicalresponse (Lagging et al., Hepatology 2008;47:1837-45) 71% 91% RVR 62% 41% n = 120n = 111 n = 68n = 71 No RVR PegIFN-2a Traitement court : Génotypes 2/3 Stratégie diagnostique & suivi virologique
    145. 145. • Durée de traitement de 6 mois chez tous les patients avec une RVR indépendamment du génotype • Raccourcissement de la durée de traitement à 12 ou 16 semaines chez les patients infectés par une génotype 2/3 avec un ARN indétectable à S1 ou S2 (?) Résumé Stratégie diagnostique & suivi virologique
    146. 146. Allongement de la Durée de Traitement
    147. 147. Traitement Long : Génotypes 2/3 • Older age • Male gender • High BMI • Fibrosis ≥ F3 Stratégie diagnostique & suivi virologique
    148. 148. Génotype 1 : Traitement Long 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 48 weeks (n=230) 72 weeks (n=225) 53% 54% %SVR Berg et al., Gastroenterology 2006;130:1086-97 Stratégie diagnostique & suivi virologique
    149. 149. 0 20 40 60 80 100 %deRVP NS NS NS p=0.04 S 4 S 12 S 4 S 12 ARN VHC < 50 UI/ml ARN VHC ≥ 50 UI/ml Berg et al., Gastroenterology 2006;130:1086-97 48 semaines 72 semaines Génotype 1 : Traitement Long Stratégie diagnostique & suivi virologique
    150. 150. Résumé Stratégie diagnostique & suivi virologique • Allongement de la durée de traitement à 72 semaines améliore la RVS : – Chez les patients avec une RVP partielle – Chez les non-répondeurs à un premier traitement par une bi-thétrapie standard qui sont retraités
    151. 151. HEPATITE C : Résistance aux Traitements
    152. 152. • Définition – Propriétés intrinsèques des souches virales qui s’opposent à l’action antivirale des effecteurs ou à des médicaments antiviraux Résistance aux traitements Résistance Virale
    153. 153. • Résistance du VHC à la thérapie par l’interféron • Résistance du VHC à la ribavirine • Résistance du VHC aux inhibiteurs spécifiques Résistance aux traitements Résistance du VHC
    154. 154. • Résistance du VHC à la thérapie par l’interféron • Résistance du VHC à la ribavirine • Résistance du VHC aux inhibiteurs spécifiques Résistance aux traitements Résistance du VHC
    155. 155. PEG-IFN- 2a + ribavirine (Fried et al., 2002) PEG-IFN- 2b + ribavirine (Manns et al., 2001) Manns et al., Lancet 2001;358:958-65 ; Fried et al., N Engl J Med 2002;347:975-82; Hadziyannis et al., Ann Intern Med 2004;140:346-55. PEG-IFN- 2a + ribavirine (Hadziyannis et al., 2004) 54% 24% 58% 48% 18%16% Résistance aux traitements Taux d’Echecs
    156. 156. Facteurs Viraux Caractéristiques de la maladie Facteurs d’Hôte Traitement ECHECS DU TRAITEMENT
    157. 157. Cinétique Virale sous Traitement 2nde phase 7 14 T(n) Cutoff 1ère phase 1 0 1 2 3 2 3 4 5 6 7 Jours Neumann et al., Science 1998;282:103-7. Résistance aux traitements
    158. 158. 0 1 2 3 4 5 6 7 0 4 7 8 15 22 291-7-28 Cut-off tests qualitatifs Cut-off tests quantitatifs Génotype 4 Génotype 1 Génotype 3 ARNduVHC(Log10UI/mL) Jours 7 Résistance Intrinsèque Résistance aux traitements Pawlotsky et al., manuscript en preparation.
    159. 159. 0 1 2 3 4 5 6 7 0 4 7 8 15 22 291-7-28 Cut-off tests qualitatifs Cut-off tests quantitatifs Génotype 4 Génotype 1 Génotype 3 ARNduVHC(Log10UI/mL) Jours 7 Résistance Intrinsèque Résistance aux traitements Pawlotsky et al., manuscript en preparation.
    160. 160. 0 1 2 3 4 5 6 7 0 4 7 8 15 22 291-7-28 Cut-off tests qualitatifs Cut-off tests quantitatifs Génotype 4 Génotype 1 Génotype 3 ARNduVHC(Log10UI/mL) Jours 7 Résistance Intrinsèque Résistance aux traitements Pawlotsky et al., manuscript en preparation.
    161. 161. Viral Factors Antiviral resistance Delayed clearance Longer half-life of infected cells
    162. 162. – Motif nucléotidique responsable de cette différence de sensibilité ? – Pas de sélection de mutations de résistance, même si modification de la composition de la quasi-espèce virale Résumé Résistance aux traitements
    163. 163. • Résistance du VHC à la thérapie par l’interféron • Résistance du VHC à la ribavirine • Résistance du VHC aux inhibiteurs spécifiques Résistance aux traitements Résistance du VHC
    164. 164. Mécanismes d’Action Hypothétiques de la RBV Adapted from Lau et al., Hepatology 2002; 35: 1002-9. Ribavirine Ribavirine Transporteur RMP RDP RTP GMP GTP IMPDH IMP RdRp Réplication HCV RNA Hépatocyte (2) Inhibition de la RdRp VHC(1) Inhibition de l’IMPDH HCV RNA "Catastrophe (3) Effet mutagène erreur” CTL Th1 IFN-, TNF- (4) Effets immunomodulateurs Résistance aux traitements
    165. 165. Pawlotsky et al., Gastroenterology 2004;126:703-14 -1.0 -0.5 0.0 0.5 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 Mean HCV RNA decrease (log IU/ml) Time (days) Controls Ribavirin monotherapy Résistance aux traitements Effet Antiviral de la RBV
    166. 166. Semaines * * * * * * p<0.05 24 7260524830 36 RBV jusqu’à S52 Arrêt RBV à S24 Bronowicki et al., Gastroenterology 2006 PourcentagedeRechutes(HCVRNA+) Suivi post-thérapeutique Prévention de la Rechute Résistance aux traitements
    167. 167. Prévention de la Rechute (PROVE-2) Résistance aux traitements Hézode et al., en révision favorable. T12/PR12 n/N= T12/P12 (Sans RBV) 48 22/46 0 10 20 40 50 Tauxderechutes(%) 30 T12/PR24 14 8/5719/63 30 PR48 (Contrôle) 22 10/45
    168. 168. • Ribavirin mechanisms of action in chronic hepatitis C remain unknown • Ribavirin direct antiviral effect is modest and transient • Long-term ribavirin administration does not select for specific resistance substitutions Résumé Résistance aux traitements
    169. 169. • Résistance du VHC à la thérapie par l’interféron • Résistance du VHC à la ribavirine • Résistance du VHC aux inhibiteurs spécifiques Résistance aux traitements Résistance du VHC
    170. 170. Cibles Potentielles des Inhibiteurs Spécifiques De Clercq., Nature Review Drug Discovery, 2007; 6: 1001-18 1. Attachement viral, fusion, décapsidation 2. Traduction de l’ARN viral 3. Maturation de la polyprotéine 4. Réplication du génome viral 5. Maturation de la particule virale Résistance aux traitements
    171. 171. Viral entry inhibitors Hepatitis C immunoglobulin HCIg) HCV-Ab 68 and Ab 65 (monoclonal Ab) HCV RNA translation inhibitors ISIS 14803 (antisense) AVI – 4065 (antisense) Heptazyme (ribozyme) VGX-410C (small molecule IRES inhibitor) TT 033 (siRNA) Posttranslational processing inhibitors NS3-4A serine proteinase inhibitors BILN 2061 ITMN 191 VX-950 SCH 503034 ACH-806/GS-9132 HCV replication inhibitors NS5B polymerase inhibitors MK-0608 HCV-796 R1626 JTK-003 NM-283 XTL 2125 Cyclophilin B inhibitors DEBIO-025 NIM 811 NS5A inhibitors A-831, A-689 Helicase inhibitors QU663 Recombinant Ab fragments Virus assembly and release inhibitors UT-231B (iminosugar-glucosidase inhibitor) Celgosivir (glucosidase inhibitor) Phase of Development * * * * Preclinical I II III IV * * * Pawlotsky JM, Chevaliez S, McHutchison JG, Gastroenterology 2007;132:1979-98. Résistance aux traitements Molécules en Développement
    172. 172. sensible résistant sensible résistant Inhibiteur résistant sensible Résistance aux traitements Mécanismes de la Résistance Arrêt inhibiteur
    173. 173. sensible résistant Inhibiteur résistant sensible Résistance aux traitements Mécanismes de la Résistance sensible résistant + fit Arrêt inhibiteur
    174. 174. sensible résistant Inhibiteur résistant sensible Résistance aux traitements Mécanismes de la Résistance résistant trés fit sensible Arrêt inhibiteur
    175. 175. De Clercq., Nature Review Drug Discovery, 2007; 6: 1001-18 Inhibiteurs en Développement Résistance aux traitements
    176. 176. • Inhibiteurs de la maturation de la polyprotéine – Anti-protéase NS3 • Telaprevir (VX-950) • Boceprevir (SCH503039) • ITMN-191 • Inhibiteurs de la réplication Virale – Analogues nucléosidiques : R1626, R7128 – Analogues non nucléosidiques : GS9190 Résistance aux traitements Inhibiteurs en Développement
    177. 177. • Inhibiteurs de la maturation de la polyprotéine – Anti-protéase NS3 • Telaprevir (VX-950) • Boceprevir (SCH503039) • ITMN-191 • Inhibiteurs de la réplication Virale – Analogues nucléosidiques : R1626, R7128 – Analogues non nucléosidiques : GS9190 Résistance aux traitements Inhibiteurs en Développement
    178. 178. Telaprevir (VX-950) Boceprevir (SCH 503034) ITMN 191
    179. 179. NS4B p7 NS4A Résistance aux traitements Inhibiteurs de la Maturation de la Polyprotéine
    180. 180. Résistance aux traitements Mutations de Résistance aux Inhibiteurs de NS3/4A Compounds Ciluprevir (BILN 2061) Telaprevir (VX-950) Boceprevir (SCH 503034) ITMN-191 TMC435350 In vitro A156V/T, D168V/A/Y, R155Q A156V/T A156S/T, V170A, T54A A156V/T, D168V/A, R155K/Q ? In vivo No data A156S/V/T, R155K/T, T54A, V36A/M T54A No data No data
    181. 181. Résistance aux traitements Mutations de Résistance aux Inhibiteurs de NS3/4A Compounds Ciluprevir (BILN 2061) Telaprevir (VX-950) Boceprevir (SCH 503034) ITMN-191 TMC435350 In vitro A156V/T, D168V/A/Y, R155Q A156V/T A156S/T, V170A, T54A A156V/T, D168V/A, R155K/Q ? In vivo No data A156S/V/T, R155K/T, T54A, V36A/M T54A No data No data
    182. 182. Résistance aux traitements Mutations de Résistance aux Inhibiteurs de NS3/4A Compounds Ciluprevir (BILN 2061) Telaprevir (VX-950) Boceprevir (SCH 503034) ITMN-191 TMC435350 In vitro A156V/T, D168V/A/Y, R155Q A156V/T A156S/T, V170A, T54A A156V/T, D168V/A, R155K/Q ? In vivo No data A156S/V/T, R155K/T, T54A, V36A/M T54A No data No data
    183. 183. Résistance aux traitements Mutations de Résistance aux Inhibiteurs de NS3/4A Compounds Ciluprevir (BILN 2061) Telaprevir (VX-950) Boceprevir (SCH 503034) ITMN-191 TMC435350 In vitro A156V/T, D168V/A/Y, R155Q A156V/T A156S/T, V170A, T54A A156V/T, D168V/A, R155K/Q ? In vivo No data A156S/V/T, R155K/T, T54A, V36A/M T54A No data No data
    184. 184. • A highly selective, reversible peptidomimetic inhibitor of the HCV NS3- 4A serine protease • IC50 of the order of 0.5 µM in vitro • HCV RNA level reduction of 3-4 Log10 in vivo Lin et al., AAC 2006, 50(5): 1813-1822; Zhou et al., Antimicrob Agents and Chemother 2008, 52(1): 110-120. Résistance aux traitements Telaprevir (VX-950)
    185. 185. Welsch et al., Genome Biology 2008, 9(1): R16.1-R16.18. Telaprevir
    186. 186. Reesink et al., Gastroenterology 2006, 131: 997-1002. HCVRNAchangefrom baseline(Log10IU/mL) Days -5 -4 -3 -2 -1 0 1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Baseline Placebo (n=6) VX-950 750mg q8h (n=8) -4.41 -0.21 Résistance aux traitements Antiviral Effect of TVR Monotherapy (Phase Ib)
    187. 187. Reesink et al., Gastroenterology 2006, 131: 997-1002. -5 -4 -3 -2 -1 0 1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Baseline Placebo (n=6) VX-950 450mg q8h (n=10) VX-950 1250mg q12h (n=10) VX-950 750mg q8h (n=8) -4.41 -0.21 -2.21 -2.37 HCVRNAchangefrom baseline(Log10IU/mL) Days Résistance aux traitements Antiviral Effect of TVR Monotherapy (Phase Ib)
    188. 188. T54 R155 A156 V36 Amino Acid Substitutions Associated with Telaprevir Resistance Sarrazin et al., Gastroenterlogy 2007, 132: 1767-1777. 466 7811 3.5 9 12 71 36/156A156V/T36/155T54AR155K/TV36M/AWT Résistance aux traitements
    189. 189. PROVE-2 Trial Weeks 480 2412 Placebo + Peg-IFN2a + Ribavirin (RBV) VX-950 750 mg q8h + Peg-IFN2a + RBV VX-950 750 mg q8h + Peg-IFN2a VX-950 750 mg q8h + Peg-IFN2a + RBV Peg-IFN2a + RBV Follow-up Follow-up Follow-up PR48 T12/PR24 T12/PR12 T12/P12 Follow-up 72 Zeuzem et al., AASLD 2008, Abstract 243. Résistance aux traitements
    190. 190. Zeuzem et al., AASLD 2008, Abstract 243. 80 T12/PR12 69 T12/PR24 Wk4 T12/P12 (No RBV) 13 PR48 (Control) 50 0 20 40 60 80 100 PatientsWithUndetectable HCVRNA(%) Wk4 Wk4 Wk4Wk12 43 62 Wk12 80 Wk12 73 Wk12 46 SVR 36 SVR 60 SVR 69 SVR 11/82 39/7835/82 38/82 66/8248/78 28/78 66/82 49/82 56/81 59/81 56/81 PROVE-2: RVR, EVR, SVR Résistance aux traitements
    191. 191. Relapse Rate Zeuzem et al., AASLD 2008, Abstract 243. T12/PR12 and T12/PR24 Combined 3 0 10 20 30 5/163 PatientsWithVirologic BreakthroughbyWeek12(%) 0 10 20 30 19/78 T12/P12 (No RBV) 24 19/78PatientsWithVirologic BreakthroughbyWeek12(%) Résistance aux traitements
    192. 192. Patients Receiving Telaprevir and Peg-IFN 2a without RBV • Among the 6 patients who received the combination of telaprevir and Peg-IFN2a without RBV – 3 subtype 1a patients remained HCV RNA positive on treatment – 3 patients became HCV RNA undetectable upon therapy and relapsed after treatment • 2 infected with subtype 1b • 1 infected with subtype 1a Résistance aux traitements Chevaliez et al., IASL 2008.
    193. 193. Patient 1: subtype 1a Patient 2: subtype 1a Patient 3: subtype 1a Patient 4: subtype 1b Patient 5: subtype 1a Patient 6: subtype 1b NON-RESPONDERS RELAPSERS Weeks WeeksTVR + Peg-IFN2a for 12 weeks SOC SOC Viral Kinetics Résistance aux traitements
    194. 194. Weeks WT A B C D E F R155K/N V36L/M WT A40T V36L/M + A40T R155K/N + A40T V36L/M + R155K/N V36L/M + R155K/N + A40T Patient 2 TVR-Peg-IFN Quasispecies Analysis Chevaliez et al., IASL 2008. Résistance aux traitements
    195. 195. Weeks WT A B C D E F A R155K/N V36L/M WT A40T V36L/M + A40T R155K/N + A40T V36L/M + R155K/N V36L/M + R155K/N + A40T Patient 2 TVR-Peg-IFN Quasispecies Analysis Résistance aux traitements
    196. 196. Weeks WT A B C D E F A B R155K/N V36L/M WT A40T V36L/M + A40T R155K/N + A40T V36L/M + R155K/N V36L/M + R155K/N + A40T Patient 2 TVR-Peg-IFN Quasispecies Analysis Résistance aux traitements
    197. 197. Weeks WT A B C D E F A B C D E R155K/N V36L/M WT A40T V36L/M + A40T R155K/N + A40T V36L/M + R155K/N V36L/M + R155K/N + A40T Patient 2 TVR-Peg-IFN Quasispecies Analysis Résistance aux traitements
    198. 198. Weeks WT A B C D E R155K/E + T42S WT A BWT C E Patient 3 TVR-Peg-IFN SOC Quasispecies Analysis Résistance aux traitements
    199. 199. Weeks WT A B C D E R155K/E + T42S WT A BWT C E Patient 3 TVR-Peg-IFN SOC Quasispecies Analysis Résistance aux traitements
    200. 200. Weeks WT A B C D E R155K/E + T42S WT A BWT C D E Patient 3 TVR-Peg-IFN SOC Quasispecies Analysis Résistance aux traitements
    201. 201. Pt 1 Pt 2 Pt 3 Pt 4 Pt 5 Pt 6 R26K V36L/M V36A T42S A40T A40T T54S T54S T54A Y56F T91A R155K R155K R155K/E R155T/A G174S Observed Amino Acid Changes Résistance aux traitements
    202. 202. Location of the Amino Acid Changes Résistance aux traitements
    203. 203. Location of the Amino Acid Changes Résistance aux traitements
    204. 204. • Among the 9 patients who received the triple combination of telaprevir, Peg-IFN2a and RBV – 7 patients achieved an SVR – 1 patient relapsed – 1 subtype 1b patient stopped antiviral treatment at 6 weeks when HCV RNA was undetectable and relapsed thereafter Patients Receiving the Triple Combination Résistance aux traitements
    205. 205. Weeks Patient 8 WT L14F WT L14F + V36C A B C A B CV36C * *TVR + Peg-IFN + RBV for 6 weeks Quasispecies Analysis Résistance aux traitements
    206. 206. Cys36 D81 S139 H57 F43 C36 Val36 D81 S139 H57 F43 V36 3D Structure of the V36 Mutations Résistance aux traitements
    207. 207. V36 Variants N (%) Fold- change in IC50 Relative replication capacity in Huh7.5 cells (%) WT 1.0 100 V36M 24 (10%) 7.7 77 ± 12 V36A 10 (4.1%) 8.2 104 ± 26 V36L 3 (1.2%) 2.5 ND V36G 1 (0.4%) 12.3 59 ± 8 V36C 1 (0.4%) 8.6 98 ± 9 V36 Variant Resistance Résistance aux traitements
    208. 208. V36 Variants N (%) Fold- change in IC50 Relative replication capacity in Huh7.5 cells (%) WT 1.0 100 V36M 24 (10%) 7.7 77 ± 12 V36A 10 (4.1%) 8.2 104 ± 26 V36L 3 (1.2%) 2.5 ND V36G 1 (0.4%) 12.3 59 ± 8 V36C 1 (0.4%) 8.6 98 ± 9 V36 Variant Resistance Résistance aux traitements
    209. 209. V36 Variants N (%) Fold- change in IC50 Relative replication capacity in Huh7.5 cells (%) WT 1.0 100 V36M 24 (10%) 7.7 77 ± 12 V36A 10 (4.1%) 8.2 104 ± 26 V36L 3 (1.2%) 2.5 ND V36G 1 (0.4%) 12.3 59 ± 8 V36C 1 (0.4%) 8.6 98 ± 9 V36 Variant Resistance Résistance aux traitements
    210. 210. 100 5 10 50 100 FRET Technology Telaprevir (µM) WT V36C V36M V36L V36 Variants IC50 VX-950 (S.E.) (µM) Fold-change WT 0.6 (0,2) 1 V36L 1.3 (0.1) 2 V36C 2.4 (1.3) 4 V36M 3.05 (3.85) 5 V36 Variant Resistance Résistance aux traitements
    211. 211. • Inhibiteurs de la maturation de la polyprotéine – Anti-protéase NS3 • Telaprevir (VX-950) • Boceprevir (SCH503039) • ITMN-191 • Inhibiteurs de la réplication Virale – Analogues nucléosidiques : R1626, R7128 – Analogues non nucléosidiques : GS9190 Résistance aux traitements Inhibiteurs en Développement
    212. 212. Copyright © 2006 Merck & Co., Inc., Whitehouse Station, New Jersey, USA A NNI site A (Thumb/fingertips) Indoles Benzimidazoles NNI site B (Thumb) Phe derivatives Thiophene-COOH Dihydroxypirones Pyranoindoles (HCV371) B NNI site C (Palm) Benzothiadiazine (A-848837) Acyl-pyrrolidine Proline sulfonamide Acrylic acid derivatives Active Site Allosteric GTP C 2’-methyl nucleosides (NM283, MK608) 4’ azido-cytidine (R1626) NNI site D (R200 hinge) Benzofurans (HCV086, HCV796) A B C D
    213. 213. Copyright © 2006 Merck & Co., Inc., Whitehouse Station, New Jersey, USA A NNI site A (Thumb/fingertips) Indoles Benzimidazoles Pro 495, Pro 496, Val 499 NNI site B (Thumb) Phe derivatives Thiophene-COOH Dihydroxypirones Pyranoindoles (HCV371) Met 423 B NNI site C (Palm) Benzothiadiazine (A-848837) Acyl-pyrrolidine Proline sulfonamide Acrylic acid derivatives Asn 411, Met 414, Tyr 448 Active Site Allosteric GTP C 2’-methyl nucleosides (NM283, MK608) 4’ azido-cytidine (R1626) NNI site D (R200 hinge) Benzofurans (HCV086, HCV796) Cys 316, Val 201 A B C D
    214. 214. Placebo 500 mg bid 1500 mg bid 3000 mg bid 4500 mg bid Traitement Suivi Jours 0 5 10 15 20 25 30 -5 -4 -3 -2 -1 0 1 -2.6 log10 -3.7 log10 -1.2 log10 Réductiondel’ARNduVHC (LogUI/mL) R1626 : Phase Ib Résistance aux traitements
    215. 215. R7128 : Phase II Jours 0 5 10 15 20 25 30 -6 -5 -4 -3 -2 -1 0 PegIFN + RBV + placebo PegIFN + RBV + R7128 500 mg bid PegIFN + RBV + R7128 1500 mg bid RéductionARNVHC(Log10) Lalezari et al., EASL 2008. Résistance aux traitements
    216. 216. MK 7009 monotherapy 0 1 2 3 4 5 6 0 50 90 130 170 210 250 Day logIU/mL LOQ MK 7009 + MK-608 Chimp A Chimp B Chimp C SVR Olsen et al., APASL 2008 Combinaison de MK-7009 et MK-608 Résistance aux traitements
    217. 217. Prévention de la Résistance • Réduire au maximum la réplication virale • Augmenter la barrière pharmacologique • Utiliser des molécules avec une barrière génétique élevée • Compliance Résistance aux traitements

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