Diagnostic biologique du paludisme - Séances Pratiques de la 5e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Didier MENARD et Vincent THONIER
Les méthodes de diagnostic biologique du paludisme - Présentation de la 5e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Marie Clémence RAKOTOARIVONY - Médecin - Service de Lutte contre le Paludisme /MINSANPF - Antananarivo, Madagascar - kamansy2@yahoo,fr
Diagnostic biologique du paludisme - Conférence de la 7e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - RASON Marie-ange - Madagascar - mieange@pateur.mg
Le diagnostic biologique du paludisme - Présentation de la 4e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Grah Worro Elisabeth BEUGRE - Médecin/Chercheur - Institut Pasteur de Côte d'Ivoire - beugregrah@yahoo.fr
TECHNIQUES DE BIOLOGIE MOLECULAIRE EN PARASITOLOGIE ET MYCOLOGIE
EXTRACTION D'AN
TECHNIQUE PCR
SEQUENCAGE D'AN
GENOTYPAGE
APPORT DE LA BIOLOGIE MOLECULAIRE EN PARASITOLOGIE ET MYCOLOGIE MEDICALE
Cycle biologique de Plasmodium: le parasite et l'anophèle - Présentation de la 7e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Kabore Youssouf - Burkina Faso - kabyssef.cnrfp@fasonet.bf
Le diagnostic biologique du paludisme par microscopie - Conférence du 6e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - MENARD Didier - Madagascar - dmenard@pasteur.mg
Diagnostic biologique du paludisme - Séances Pratiques de la 5e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Didier MENARD et Vincent THONIER
Les méthodes de diagnostic biologique du paludisme - Présentation de la 5e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Marie Clémence RAKOTOARIVONY - Médecin - Service de Lutte contre le Paludisme /MINSANPF - Antananarivo, Madagascar - kamansy2@yahoo,fr
Diagnostic biologique du paludisme - Conférence de la 7e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - RASON Marie-ange - Madagascar - mieange@pateur.mg
Le diagnostic biologique du paludisme - Présentation de la 4e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Grah Worro Elisabeth BEUGRE - Médecin/Chercheur - Institut Pasteur de Côte d'Ivoire - beugregrah@yahoo.fr
TECHNIQUES DE BIOLOGIE MOLECULAIRE EN PARASITOLOGIE ET MYCOLOGIE
EXTRACTION D'AN
TECHNIQUE PCR
SEQUENCAGE D'AN
GENOTYPAGE
APPORT DE LA BIOLOGIE MOLECULAIRE EN PARASITOLOGIE ET MYCOLOGIE MEDICALE
Cycle biologique de Plasmodium: le parasite et l'anophèle - Présentation de la 7e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Kabore Youssouf - Burkina Faso - kabyssef.cnrfp@fasonet.bf
Le diagnostic biologique du paludisme par microscopie - Conférence du 6e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - MENARD Didier - Madagascar - dmenard@pasteur.mg
Manuel de formation au diagnostic biologique du paludisme - Conférence du 5e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Didier MENARD et Vincent THONIER
ce cours est destiné aux étudiants graduant en médecine et en pharmacie. il résume les aspects épidémiologiques, cliniques, diagnostic et thérapeutiques relatifs aux hépatites virales
les trypanosomoses africaines à Trypanosoma brucei gambiense et T.b. rhodesiense ou maladie de sommeil, Afrique subsaharienne, transmise par la salive de glossine
la trypanosomose américaine à trypanosoma cruzi ou maladie de chagas, transmise par les déjections de réduve,en amérique latine
Physiopathologie et diagnostic de l'accès pernicieux - Présentation de la 2e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - RAKOTOBE Rodolphe Donatien - MINISTERE de la SANTE et du PLANNING FAMILIAL de MADAGASCAR - Responsable Paludisme, DPS Fianarantsoa - rakotobed@yahoo.fr
Intérêt des tests rapides et critères de définition de l'accès simple - Présentation de la 1ère édition du Cours international « Atelier Paludisme » - RANAIVOHARIMINA Harilala, Médecin Surveillance Epidémiologique, Min. Santé MADAGASCAR.
Manuel de formation au diagnostic biologique du paludisme - Conférence du 5e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Didier MENARD et Vincent THONIER
ce cours est destiné aux étudiants graduant en médecine et en pharmacie. il résume les aspects épidémiologiques, cliniques, diagnostic et thérapeutiques relatifs aux hépatites virales
les trypanosomoses africaines à Trypanosoma brucei gambiense et T.b. rhodesiense ou maladie de sommeil, Afrique subsaharienne, transmise par la salive de glossine
la trypanosomose américaine à trypanosoma cruzi ou maladie de chagas, transmise par les déjections de réduve,en amérique latine
Physiopathologie et diagnostic de l'accès pernicieux - Présentation de la 2e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - RAKOTOBE Rodolphe Donatien - MINISTERE de la SANTE et du PLANNING FAMILIAL de MADAGASCAR - Responsable Paludisme, DPS Fianarantsoa - rakotobed@yahoo.fr
Intérêt des tests rapides et critères de définition de l'accès simple - Présentation de la 1ère édition du Cours international « Atelier Paludisme » - RANAIVOHARIMINA Harilala, Médecin Surveillance Epidémiologique, Min. Santé MADAGASCAR.
Prise en charge du Paludisme en Afrique : pas d’ACT sans diagnostic ? - Conférence du 3e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - RABARIJAONA Léon - Institut Pasteur de Madagascar - leon@pasteur.mg
Stratégies de distribution d'antipaludiques et automédication en zone enclavée - Conférence de la 6e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - RANDRIAMANANA Saholiarivony - Madagascar
La lutte contre le paludisme: à la recherche des stratégies complémentaires - Conférence de la 4e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Richard PAUL - Institut Pasteur de Paris France - rpaul@pasteur.fr
Points essentiels de la connaissance récente (depuis l’an 2005) du complexe Anopheles gambiae - Présentation de la 8e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - RAHASIVELO TSIMAHOLY Zanah - Madagascar - zrahasivelotsimaholy@yahoo.fr
Système de santé, prise en charge des cas et recours aux soins - Romy RAZAKANDRAINIBE - Etudient - Chercheur - Institut Pasteur de Madagascar - Antananarivo, Madagascar - romy@pasteur.mg
Mobilité humaine et transfert de plasmodies - Présentation de la 7e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Ngamada François - Tchad - ngama_franc@yahoo.fr
Programmation Orientée Objet, la fin des conditionsBlack-Heaven
Aujourd'hui la Programmation Orientée Objets (POO) est l'une des techniques de programmation les plus utilisées. Cette technique à pour but de nous aider à obtenir un code plus modulaire, plus simple, plus aisément testable, plus expressif, permettant la maintenance et l'évolution de manière efficace.
Le soucis ? personne n'apprends la POO directement, généralement on a du apprendre à faire sans à base de if-then-else ou de switch, nous n'utilisons pas toute la puissance de la POO si nous continuons à utiliser ces mécanismes car ils rendent compliqué les tests (il faudra plus de tests pour arriver à une couverture de code puisque la complexité cyclomatique sera plus élevée), l'évolution sera douloureux (avec la modification de nombreuses parties du code), les modèles/prototypes des classes sont obscures, etc.
Le but de cette intervention sera donc, via un exemple complet, de vous montrer que la plupart des conditions n'ont pas lieu d'être quand on utilise la POO correctement.
Entomologie moléculaire et étude de la structuration génétique des anophèles - Présentation de la 2e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - RANDRIANASOLO Laurence - INSTITUT PASTEUR de MADAGASCAR BP 1274 Antananarivo, Madagascar - laurandrianas@yahoo.fr
Pharmacogénétique et antipaludiques : que sait-on sur les ACTs actuellement ? - Présentation de la 7e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Kamal Aoufi et Martin Catherine
Réversion de la résistance aux antipaludiques - Présentation de la 4e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Germaine RETOFA - Médecin - Ministère de la Santé et du Planning Familial - Service de Lutte Contre le Paludisme - Madagascar
Mortalité et morbidité palustre en fonction du niveau de transmission - Présentation de la 5e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Célestin RAZAFINJATO - Médecin - INSPC - Antananarivo, Madagascar - razafinjatocelestin@yahoo.fr
Le diagnostic : méthodes - Présentation de la 1ère édition du Cours international « Atelier Paludisme » - AFFANE Bacar, Chargé de la Surveillance Epidémiologique, Min. Santé Union des COMORES.
Prévalence des infections à Plasmodium : apport des nouvelles méthodes de détection du parasite - Présentation de la 8e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - ANDRIANARANJAKA Voahangy Hanitriniaina - Madagascar - fararanontsoa@gmail.com
Anti-paludogramme - Tests de chimiosensibilité in vitro : un test de phénotypage - Travaux pratiques de la 2e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - ANDRIANANTENAINA Hery - RANDRIANARIVELOJOSIA Milijaona - RASON Marie-Ange
Anti-paludogramme - Tests de chimiosensibilité in vitro : un test de phénotypage - Travaux pratiques de la 2e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - ANDRIANANTENAINA Hery - RANDRIANARIVELOJOSIA Milijaona - RASON Marie-Ange
Place des tests de diagnostic rapide dans le traitement du paludisme - Conférence de la 2e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - LE BRAS Jacques - Service de Parasitologie, Bichat Claude Bernard - Paris - jacques.lebras@bch.ap-hop-paris.fr
Tests de Diagnostic Rapide (TDR) du paludisme sous les tropiques. Parole de junior de la 8ème édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Elisabeth Ravaoarisoa
Outils moléculaires disponibles pour surveiller la résistance aux antipaludiques - Présentation de la 5e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Claude GIRY - Biologiste - Centre Hospitalier - Mamoudzou, Mayotte - c.giry@chmayotte.fr
Le diagnostic : méthodes - Présentation de la 2e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - RAKOTONDRAIBE Maroafy Emmanuel - MINISTERE de la SANTE et du PLANNING FAMILIAL de MADAGASCAR - Service de Lutte Contre le Paludisme - ramanuel@iris.mg
Face aux enjeux multiples associés aux avortements (limitation de l’impact économique, gestion efficace du risque zoonotique, renforcement des bonnes pratiques de maîtrise tant sur le plan vaccinal que thérapeutique), l’amélioration du diagnostic étiologique de troupeau constitue l’un des tous premiers buts à atteindre. Elle passe en particulier par une optimisation des procédures de prélèvement et par une plus large utilisation d’analyses conventionnelles et innovantes. C'est dans ce cadre qu'un nouvel outil de diagnostic direct a été proposé fin 2022 par l’ENVT et AVEYRON LABO. Il associe une recherche très large d’agents infectieux avérés ou potentiels, et une technologie innovante. Dominique Bergonier présente les enjeux, les principes de cet outil et en illustre l'utilisation sur des exemples concrets. Son intervention est réalisée dans le cadre du Webinaire de l'UMT PSR du 26 Avril 2023
Bilan de l’affaire viande de cheval : quels verrous technologiques pour garan...Pôle Qualiméditerranée
Authentification et quantification des espèces animales dans les produits transformés. Jean-Philippe ROSEC (DIRECCTE - Service Commun des Laboratoires).
Surveillance de la chimiosensibilité de Plasmodium falciparum - Conférence de la 1ère édition du Cours international « Atelier Paludisme » - RANDRIANARIVELOJOSIA Milijaona
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Guide pour le suivi et l'évaluation des programmes - Séances Pratiques de la 5e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Luciano TUSEO - World Health Organization / Roll Back Malaria - Office for Madagascar and Reunion - Antananarivo, Madagascar - maloms@iris.mg
Monitoring and Evaluation Toolkit - Séances Pratiques de la 5e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Luciano TUSEO - World Health Organization / Roll Back Malaria - Office for Madagascar and Reunion - Antananarivo, Madagascar - maloms@iris.mg
Développement nouveaux médicaments - Séances Pratiques de la 5e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Pascal MILLET - Université Victor Segalen Bordeaux2, France - pascal.millet@u-bordeaux2.fr
Guide d’élaboration d’un plan de gestion des achats et des stocks (Global Funds) – (Version C) - Séances Pratiques de la 5e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - René CAZETIEN - Sanofi Aventis, Gentilly, France - rene.cazetien@sanofi-aventis.com
4. 2. Diagnostic direct
Se fait à partir du sang
Quand effectuer le prélèvement ?
Combien de prélèvements ?
Procédure et précautions
Au moment du prélèvement : gants,
matériel jetable, etc.
Transport des prélèvements
Traitement au laboratoire
5. 2. Diagnostic direct
1 Mise en évidence du parasite :
Microscopie
Quantitative Buffy Coat (QBC)
Cytométrie de flux
2 Mise en évidence d’ag parasitaire
Test rapide sur bandelette (dipstick)
ELISA, RIA
3 Mise en évidence d’ADN parasitaire
PCR
Sondes nucléiques
6. 2.1.a Microscopie
La goutte épaisse et le frottis
Réalisation pratique
La coloration
Giemsa
Autres colorations
Points techniques importants
7. 2.1.a Microscopie
La lecture au microscope
Sensibilité de la méthode et
expression de la densité parasitaire
Pour 100 champs de microscope soit 10 min. de lecture
nb de GR nb de GB volume examiné sensibilité
Frottis 5x 10 4 60 0,01 µl 100-200 para /µl
Goutte épaisse 1x 10 6 1200 0,2 µl 10-20 para /µl
1 µl de sang il y a environ 5 000 000 de GR et 6000 GB
9. 2.1.a Microscopie
La lecture au microscope
Les espèces parasitaires Pf, Pv, Po, Pm
Distribution hétérogène
Diagnostic d’espèce sur la base de
critères morphologiques
14. 2.1.b QBC
Principe
Sang au bout du doigt
Tube capillaire+Acridine O
Centrifugation
Lecture microscope UV
FLUORESCENCE
Sensibilité
Volume examiné : 60 µl vs 0.2 µl GE
Sensibilité 1 para/µl
15. 2.1.b QBC
P vivax P falciparum
P falciparum P vivax+ granulocytes Pf gametocyte
16. 2.1.b QBC
Avantages
Rapidité
Bonne sensibilité
Inconvénients
Toxicité de l’acridine, coût élevé
Equipements
Personnel expérimenté
Pas approprié au terrain
Pas quantitatif, espèces ?
17. 2.1.c Cytométrie
Marquage des cellules avec un colorant
fluorescent : Hoechst ou thiazole orange
Tri des cellules en fonction de la
fluorescence et de la taille
Evaluation de la parasitémie. Très bonne
sensibilité mais bruit de fond important dû
aux réticulocytes
Utilisée couplée avec immunofluorescence
de surface pour analyse phénotypique GRP
18. 2.2.a Test Rapid «Dipstick»
Principe : Détection d’antigènes
parasitaires par immunochromatographie
Récolte du sang au bout du doigt
Lyse du sang
Migration des antigènes libérés
Détection avec un ou plusieurs Acmx
marqués
20. 2.2.a Test Rapid «Dipstick»
Quels antigènes ?
HRPII
P.falciparum (ICT, ParaSight, ParaCheck)
Trophozoites et jeunes gamétocytes
Fonction de détoxification de l’hème ?
pLDH
Antigène non spécifique (OptiMal)
Tous les stades
Autres utilisations
Alternative aux méthodes isotopiques
21. 2.2.a Test Rapid «Dipstick»
Sensibilité
>95% (comparé à la microscopie
100%)
100 % pour Pf pour des densités >300
p/µl
Sensibilité moindre pour Pv (autres
espèces ?)
22. 2.2.a Test Rapid «Dipstick»
Spécificité
Autour de 90%
Faux positifs (HRPII essentiellement)
23. 2.2.a Test Rapid «Dipstick»
Avantages
Rapide : 5 min.
Peut être réalisé sans expérience
Bonne sensibilité et bonne spécificité
Ne nécessite pas d’équipements
spécifiques
Adapté au terrain
24. 2.2.a Test Rapid «Dipstick»
Inconvénients
Coût : 1-2 USD.
Pas quantitatif
Ne distingue pas Pv des autres espèces
Stabilité des réactifs sur le terrain ?
Nombre important de faux positifs
Ne donne pas d’indication sur la
viabilité des parasites
26. 2.2.b RIA et ELISA
Principe : Détection d’antigènes para-
sitaires
Utilisation d’anticorps monoclonaux
Technique en « sandwich »
Pas d’intérêt réel pour le diagnostic
Utilisables pour la détection de
sporozoites chez les vecteurs
27. 2.3 Diagnostic Moléculaire
Principe
ADN du parasite
PCR et /ou hybridation
Choix de séquences cibles avec
régions polymorphes et conservées
Analyse
28. 2.3.a Diagnostic Moléculaire
DIAGNOSTIC PAR PCR
SSUrRNA genes
PRIMAIRE
SECONDAIRES Spécifiques
1 de genre
P. sp
P . falciparum
2 P. vivax Spécifiques
P. malariae d’espèces
P. ovale
35. 3. Diagnostic sérologique
Principe :
Recherche d’anticorps spécifiques
Détection du complexe ag/ac par
1 . Immunofluorescence indirecte
2 . Elisa
3 . Radioimmunoanalyse
4 . Test sérologique sur bandelette
36. 3.1 IF indirecte
Parasites fixés à l’air
ou à l’acétone
Dilutions du sérum
Anti-anticorps
fluorescent
Mesure de l’extinction
de la fluorescence :
titre en Ac spécifiques
37. 3.2 ELISA
Ag parasitaire brut, ou fraction purifiée,
ou peptide synthétique
Dilutions du sérum
Anti-anticorps marqué par un enzyme
Révélation de l’activité enzymatique
Mesure des DO
Titre en anticorps spécifiques par
rapport à un seuil.
38. 3. 3 ELISA
Exemple d’inhibition
de la réactivité
d’anticorps
spécifiques
Anti-CSP par le
peptide
synthétique
homologue
Pf et par le peptide
hétérologue Pm
correspondant
39. 3. 3 RIA
Comparable aux autres tests dans la
conception :
Gamme de dilutions des sérums
Anti-anticorps marqué avec isotope *
Mesure des cpm
Titre en Ac spécifiques par rapport
à un seuil
40. 3.3 Dipsticks pour sérologie
Format « dipstick »
Détection qualitative des Ac spécifiques
dans le sang, plasma ou sérum.
Spécifique pour Pv et Pf
Sensibilisation du support avec les Ag
CSP et MSP1
Enquêtes épidémiologiques
41. 3.4 Utilité de la sérologie ?
Pas d’intérêt pour le diagnostic
sauf :
Criblage des donneurs de sang
Complément d’information chez un
patient suspecté de paludisme mais
avec gouttes épaisses négatives
Diagnostic d’espèce rétrospectif
42. PISTES DE RECHERCHE
Améliorations possibles
Tests rapides
Lecture quantitative
Caractérisation des espèces
Améliorer la sensibilité et la spécificité
Instaurer un contrôle qualité
Développer une banque de réactifs pour
tester la qualité des « dispticks »
Combiner sur la même bandelette un
diagnostic paludisme et Dengue
43. PISTES DE RECHERCHE
Améliorations possibles
PCR
Standardiser la méthode
Développer un kit PCR de diagnostic
Automatiser la méthode pour des
études à grande échelle
44. PISTES DE RECHERCHE
Recherche
Tests rapides
Etudier la persistances des antigènes
HRPII et pLDH après le traitement.
Etudier le polymorphisme HRPII et pLDH
chez des parasites sauvages.
Développer d’autres systèmes
antigéniques pour la détection spécifique
des stades asexués et sexués
45. PISTES DE RECHERCHE
Recherche
Tests rapides
Evaluer la possibilité de mise au point
d’un test rapide pour déterminer la
sensibilité d’un isolats à un médicament
Etudier la durée de validité des
« dipsticks » dans les conditions du
terrain